Los nódulos son nichos adecuados para la transferencia de plásmidos de rizobios

LUIS BAÑUELOS; GONZALO A. TORRES TEJERIZO; LAURA CERVANTES; LOURDE GIRARD; DAVID ROMERO; SUSANA BROM

Mar del Plata

Congreso; IV CAMAyA; 2018

Rhizobium etli CFN42 tiene una gran importancia agrícola debido a su capacidad de establecer una simbiosis con Phaseolus vulgaris formando nódulos fijadores de nitrógeno. El genoma de R. etli CFN42 está constituido por un cromosoma y seis plásmidos de gran tamaño. Entre estos, está el pRet42a, un plásmido conjugativo. La expresión de los genes de transferencia está regulada por un sistema de tipo quorum sensing que incluye un gen traI el cual codifica para una homoserín lactona y dos reguladores transcripcionales (TraR y CinR), que inducen la transcripción de dichos genes en respuesta a traI. El objetivo de este trabajo es determinar la capacidad de transferencia conjugativa del pRet42a en los nódulos, que se han considerado estructuras exclusivas para la fijación de nitrógeno. Para hacer estos experimentos, utilizamos la estrategia de doble marcaje fluorescente. El cromosoma de la cepa donadora se marcó con la proteína roja fluorescente (RFP) y con la proteína verde fluorescente (GFP) en el pRet42a. Al transferirse el plásmido a la receptora, las transconjugantes solo expresarán la GFP, permitiendo su detección diferencial. En los experimentos pudimos visualizar transconjugantes en los nódulos y en la rizosfera. Utilizamos 3 estrategias para determinar si la conjugación ocurría solamente en la rizosfera o también en el interior de los nódulos: 1) determinamos el nivel transcripcional de genes conjugativos, fusionándolos con un gen reportero (ptraA::GFP, ptraI::GFP), 2) inhibimos la conjugación en la rizosfera, utilizando TraM, un antiactivador de los receptores traR y cinR y 3) el gen traI se puso bajo el promotor nifH, de tal manera que solo se encienda dentro del mismo. Los resultados indicaron que la maquinaria de conjugación está activa dentro del nódulo, que se encuentran transconjugantes en nódulo tanto al inhibir la conjugación en la rizosfera con traM, como al poner la regulación de TraI bajo el promotor de nifH. Estos resultados sugieren fuertemente que la conjugación puede ocurrir dentro del nódulo, además de en la rizosfera.