INVESTIGADORES
TORRES TEJERIZO Gonzalo Arturo
congresos y reuniones científicas
Título:
Construcción de herramientas RIVET para el estudio de expresión de genes expresados durante la simbiosis Sinorhizobium meliloti-alfalfa
Autor/es:
SALAS EUGENIA; MAURICIO LOZANO; MARÍA CARLA MARTINI; JOSÉ LUIS LÓPEZ; ILEANA SALTO; GONZALO TORRES TEJERIZO; MARÍA DE LOS ÁNGELES GIUSTI; MARÍA FLORENCIA DEL PAPA; MARIANO PISTORIO; ANTONIO LAGARES
Lugar:
Piriapolis, Maldonado
Reunión:
Congreso; XXV Reunión Latinoamericana de Rizobiología la XXV y I Congreso Nacional de Microorganismos Promotores del Crecimiento Vegetal (I MIPCV); 2011
Institución organizadora:
RELAR
Resumen:
El cultivo de alfalfa resulta de particular importancia en países
ganaderos por ser la principal fuente forrajera que alimenta al ganado
vacuno. En ese contexto, el mejoramiento racional de la simbiosis de
alfalfa con rizobios eficientes debe ir acompañado de una
caracterización detallada a nivel molecular del proceso de asociación, y
de la influencia del entorno sobre el mismo. Lamentablemente, las
técnicas de estudio de expresión de genes mayormente utilizadas, tales
como micro y macro arrays, resultan en muchos casos limitadas cuando se
desea caracterizar etapas de la simbiosis que son de difícil acceso ó
donde el material de interés es escaso (ej. hilos de infección, nichos
del interior del nódulo). Con el propósito de desarrollar nuevas
técnicas para el estudio de la simbiosis, en nuestro laboratorio hemos
trabajado en la construcción de herramientas RIVET (Recombination-based
In Vivo Expression Technology) para su aplicación en el sistema S.
meliloti-alfalfa. Estas técnicas se basan en la utilización del gen sin
promotor tnpR que codifica una recombinasa especifica de sitio, para
realizar fusiones transcripcionales a lo largo de todo el genoma de S.
meliloti. La expresión de la recombinasa a partir de promotores del
rizobio y la pérdida subsiguiente de un cassette indicador de DNA,
permite luego la selección fenotípica de aquellos clones que expresan
genes que sólo se encienden en nichos de interés (ej. a lo largo de la
simbiosis). En este trabajo hemos construido una nueva herramienta RIVET
basada en el uso de un transposón derivado del Tn5 para generar las
fusiones transcripcionales a tnpR. Este nuevo transposón, que se
encuentra en un plásmido suicida en rizobios, posee en uno de sus
extremos un fragmento que consta de las 19bp necesarias para la unión de
la transposasa y que sustituye la IS50L. En el otro extremo hemos
preservado la IS50R intacta. Rio abajo del extremo izquierdo, y seguido
de señales terminadoras de la traducción, hemos clonado el gen tnpR sin
promotor, un gen que codifica resistencia a tetraciclina, y el origen de
transferencia conjugativa oriT del plásmido RP4. La nueva herramienta
será utilizada para la construcción de fusiones transcripcionales a tnpR
en S. meliloti y podrá ser empleada para la generación de bibliotecas
RIVET en otros rizobios y bacterias de interés sin la necesidad de
generar bibliotecas plasmídicas.