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La asociación de la fosfatasa alcalina intestinal (FAi) con el proceso de absorción de calcio (Ca2+) es parcialmente conocida pero indiscutible. Experimentos previos indicaron que el Ca2+ se fija a la FAi produciendo modificaciones en su actividad y estructura. Con la enzima purificada se demostró que el Ca2+ modifica la actividad de manera bifásica y participaría en el mantenimiento de la estructura dimérica activa. In vivo, la actividad de la FAi ligada a la membrana aumentó siguiendo una función directa de la concentración de Ca2+ luminal. Existe evidencia de que la disminución del pH del lumen intestinal modificaría la actividad de los canales TRPV6 encargados del pasaje de Ca2+ a través de la membrana apical del enterocito y es conocido que la FAi hidroliza éster fosfóricos generando fosfato y descenso del pH. El aumento de actividad de FAi podría generar fosfato y precipitar el Ca2+ como fosfato de calcio y el descenso del pH disminuir la actividad del canal TRPV6; en ambos casos se asociaría una disminución de la absorción de Ca2+. El objetivo de este trabajo fue evaluar el efecto del pH generado por la acción de la FAi expuesta a diferentes concentraciones de Ca2+ luminal sobre la absorción intestinal de Ca2+. Se realizaron experimentos de sacos duodenales evertidos con el objetivo de evaluar el efecto del pH y el fosfato sobre la absorción de Ca2+ y su relación con la actividad de la FAi. La mucosa intestinal fue expuestas a una solución Tris 1mM, MgCl2 1mM, glucosa 160 mM, Ca2+ 1, 10, 50 o 100 mM, pH 9 y la serosa a la misma solución pero sin Ca2+ (n=4 por grupo), bajo agitación constante y temperatura de 37 ºC. Se tomaron muestras de la solución en contacto con la mucosa a tiempo inicial, 10 y 20 minutos en las que se determinó calcio, fósforo y pH. El porcentaje de Ca2+ absorbido se calculó a través de la diferencia entre la concentración de Ca2+ inicial y a los 20 minutos con un kit comercial (Ca Color, Wiener Lab, Rosario, Argentina). La concentración de fósforo total se determinó con un kit comercial (Fosfatemia UV, Wiener Lab, Rosario, Argentina) al inicio, 10 y 20 minutos y el pH con un pHmetro HANNA HI 9017. Con la concentración de fósforo, el pH y la concentración de Ca2+ se estimó la cantidad de fosfato de calcio formado, no disponible para el proceso de absorción. Los experimentos detallados también fueron llevados a cabo en presencia de L-fenilalanina, inhibidor de la FAi. Se observó un descenso significativo del porcentaje de Ca2+ absorbido al aumentar la concentración de Ca2+ (Ca2+ 1mM=45; Ca2+ 10mM=42; Ca2+ 50mM=38; Ca2+ 100mM=30). Simultáneamente se observó un descenso significativo del pH en la solución en contacto con la mucosa (Ca2+ 1mM=7.81; Ca2+ 10mM=7.35; Ca2+ 50mM=6.90; Ca2+ 100mM=6.86). En todos los experimentos, la formación de fosfato de calcio fue despreciable, no pudiendo atribuirse a la misma la disminución de la fracción de absorción de Ca2+. Cuando los experimentos fueron llevados a cabo en presencia de L-fenilalanina no se observó un descenso de pH tan marcado (Ca2+ 1mM=8.33; Ca2+ 10mM=8.05; Ca2+ 50mM=8.17; Ca2+ 100mM=8.28) y se obtuvo un incremento en la fracción de absorción de Ca2+ (Ca2+ 1mM=53; Ca2+ 10mM=56; Ca2+ 50mM=42; Ca2+ 100mM=40) en todas las concentraciones de Ca2+ investigadas. Estos resultados fortalecerían la hipótesis que el pH regularía la entrada de Ca2+ al enterocito y la FAi actuaría como sensor de las concentraciones de Ca2+ luminal e impediría el ingreso de cantidades tóxicas del catión al enterocito. Están siendo llevados a cabo experimentos in vivo a fin de observar el impacto biológico de estos hallazgos.

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