Evaluación del tejido óseo trabecular en ratones knock-out de fosfatasa alcalina intestinal.

BRUN LUCAS; LOMBARTE M; CORNEJO A; VILLARREAL L; MILLÁN JL; RIGALLI A

Buenos Aires

Congreso; 1° Congreso Argentino de Osteología AAOMM-SAO; 2016

AAOMM-SAO

La fosfatasaalcalina intestinal (FAi) es una enzima de membrana del enterocito que aumentasu actividad enzimática a medida de que se incrementa la concentración luminalde calcio (Ca). Simultáneamente se produce una disminución en el pH luminal yen la absorción de Ca; efectos atenuados por la presencia de un inhibidor de laFAi, el aminoácido L-fenilalanina. Previamente, se evaluaron ratones C57BL/6deficientes del gen de fosfatasa alcalina duodenal (Akp3-/-) y seobservó una leve atrofia vellositaria con disminución en altura yensanchamiento de las mismas, lo cual conlleva a una menor superficie de absorción.Al evaluar la absorción de Ca, se observó que los ratones KO absorben más Ca enfunción de la superficie de absorción. Por otro lado, en los huesos de ratonesKO no se observaron diferencias en el ensayo de fractura a 3 puntos -que evalúatejido cortical- en los diferentes parámetros evaluados: fuerza de fractura,fuerza máxima, energía absorbida y rigidez. En cambio, el ensayo de fracturadel cuello femoral que evalúa tejido trabecular, si mostró mayor fuerza defractura, fuerza máxima y energía absorbida en los ratones KO. Por lo tanto, elobjetivo de este trabajo fue evaluar la densidad mineral ósea (DMO) y losparámetros histomorfométricos en huesos de ratones KO. Para ello se emplearonratones C57BL/6 hembras KO (n=10) y controles wildtype (WT, n=6) de 4 meses de edad. Los parámetroshistomofométricos (porcentaje de tejido óseo [BV/TV, %], espesor trabecular[Tb.Th, mm] y número de trabéculas [Tb.N, 1/mm]) y de conectividad trabecular(índices de conectividad [ICI y NDX] y relación nodo-terminal [R]) serealizaron sobre imágenes digitales (100x) de cortes histológico de tibiateñidos con H&E empleando el software Image J 1.40. La DMO (mg/cm2)de la tibia fue determinada empleando un equipo de rayos X (70 kV)simultáneamente con un patrón de concentraciones de Ca conocidas. Se determinóDMO total y DMO a nivel de la zona en donde se evaluaron los parámetroshistomofométricos. Además, se utilizaron las radiografías para estimar el largoy ancho del hueso y el espesor del tejido cortical. Los resultados se expresancomo media±EE y seanalizaron empleando t de Student para datos independientes considerándosesignificativo cuando p<0.05. Resultados: No se observaron diferenciassignificativas en la DMO total (WT= 12.96±2.47; KO=14.84±1.69) nitrabecular (WT= 10.47±3.04; KO=13.30±1.54). Losresultados morfométricos (largo y ancho del hueso y el espesor del tejidocortical) no mostraron diferencias significativas. Si bien el BT/TV no mostródiferencias significativas (WT= 9.29±1.25; KO=14.58±2.59) se observóun incremento considerable del volumen óseo trabecular en los ratones KO. Esteincremento fue a expensas de un mayor espesor trabecular (WT= 0.025±0.003;KO= 0.037±0.005) sincambios en el número de trabéculas. La relación nodo-terminal fue significativamentemayor en los ratones KO (WT= 0.16±0.04; KO=0.30±0.32; p<0.05). En forma similarpero sin alcanzar significado estadístico debido a la dispersión de los datos,los parámetros de conectividad trabecular ICI y NDX se hallaron aumentados enel grupo KO (ICI: WT= 0.09±0.06; KO=0.18±0.08; NDX: WT= 0.23±0.18;KO= 1.53±0.79). Elmayor volumen óseo trabecular y la mayor conectividad entre las trabéculas enel grupo KO explicarían las mejores propiedades biomecánicas halladas enexperimentos previos.