Efecto del calcio sobre la actividad y expresión de la fosfatasa alcalina intestinal

BRUN LR; DE CANDIA LF; BRANCE ML; DI LORETO VE; RIGALLI A

Rosario

Congreso; XXVII Reunión Anual de la Sociedad de Biología de Rosario; 2007

Sociedad de Biología de Rosario

La fosfatasa alcalina intestinal (IAP) es una fosfomonoesterasa del ribete en cepillo del enterocito. Por exposición a altas concentraciones de calcio sufre modificaciones tanto funcionales como estructurales. Si bien su rol no está completamente definido, participaría en el metabolismo fosfocálcico dado que: 1. Su expresión es regulada por la vitamina D al igual que las proteínas que participan en la absorción de calcio transcelular. 2. Comparte el patrón de distribución, de predominio en la punta de las vellosidades, con el transportador intestinal de calcio. 3. Se expresa con un máximo en duodeno y una disminución gradual a lo largo de todo el intestino coincidiendo con el sitio de mayor absorción del catión. El objetivo de este trabajo fue evaluar in vivo el efecto del calcio sobre la actividad y expresión de la IAP. Se realizaron experimentos de intestino aislado in situ en ratas línea IIM/Fm, sublínea m, de 180-200g de peso corporal, con 12 horas de ayuno. Se dividieron en 4 grupos (n=5), de acuerdo a la concentración de calcio estudiada (0, 10, 50 y 100 mM). Al final del experimento se tomaron muestras del contenido luminal para medir actividad de IAP espectrofotométricamente con un kit comercial (Wienner Lab) que utiliza p-nitrofenilfosfato como sustrato. Se extrajeron porciones del duodeno y se procesaron histológicamente para determinar la actividad de la IAP en la membrana del enterocito con una técnica histoquímica empleando 5-bromo-4-cloro-3-indolil fosfato como sustrato. La expresión de IAP se determinó  inmunohistoquímicamente utilizando anticuerpo primario anti-IAP y secundario conjugado con peroxidasa  con 3-amino-9-etil carbazole como sustrato. La determinación de la actividad luminal de IAP y la expresión de la enzima en la membrana no mostraron diferencias significativas entre los grupos (ANOVA, p>0.05). Por el contrario, la determinación de la actividad de la enzima anclada en la membrana mostró un aumento significativo entre los grupos tratados con calcio 50 y 100 mM respecto del grupo control y del grupo con calcio 10 mM (ANOVA, p<0.05, post-test Bonferroni). Esta relación entre el calcio y la actividad de la IAP sumaría evidencia a favor de la participación de la enzima en el proceso de absorción del catión. Experimentos en los que se determine la relación entre estas modificaciones y la absorción de calcio, podrán confirmar esta hipótesis.