Puesta a punto de la técnica de electroforesis en geles de poliacrilamida con gradientes transversales de urea

REY F, ALEANZI M

UNER, Entre Ríos

Jornada; III Encuentro nacional de jóvenes investigadores de la Universidad Nacional de Entre Ríos; 1999

Universidad Nacional de Entre Ríos

La electroforesis en geles de poliacrilamida es un método relativamente simple que se puede utilizar para distinguir estados conformacionales de proteínas y analizar las propiedades cinéticas de la transición entre conformaciones. Las diferencias de movilidades relativas permiten una estimación cualitativa del grado de compactación. Si las velocidades de interconversión entre estados es relativamente lenta en relación al tiempo de separación elecroforética, se pueden resolver estados intermedios. Si la cinética de interconversión es rápida, la movilidad electroforética representa la distribución de equilibrio entre conformaciones. El desplegamiento de proteínas inducido por urea se puede estudiar utilizando placas de geles con gradientes transversales de urea, perpendiculares a la dirección de la migración elctroforética. En este trabajo se generaron dichos gradientes por llenado manual  o automático utilizando formadores de gradientes lineales. Se estudió el desplegamiento de la albúmina bovina realizando electroforesis en gradientes de 0 a 8 M de urea, en presencia o ausencia de agentes reductores. Los tiempos de migración oscilaron entre 60 y 90 minutos. Las imágenes obtenidas en ausencia de agentes reductores correspondieron a la de dos estados con lenta interconversión. En presencia de agentes reductores, a alta concentración, se observaron por lo menos tres estados intermedios. En todos los casos la cinética de interconversión entre estados fue  lenta, ya que aparecieron  como estados independientes.