Purificación de transglutaminasa de tejido a partir de hígado de cerdo

REY F, ALEANI M

UNL, Santa Fe

Jornada; II Encuentro Bioquímico del Litoral y V Jornada de comunicación técnico científica; 2000

Universidad Nacional del Litoral

La transglutaminasa de tejido  pertenece a una familia de enzimas  que se encuentra en distintos tejidos de animales.  Cataliza dos tipos de reacciones sobre sustratos que posean grupos amida (residuos glutamínicos): deamidación y reticulación. La única enzima comercial disponble proviene de hígado de cobayo. En este trabajo se extrajo y purificó parcialmente la enzima a partir de hígado de cerdo,  utilizando distintas técnicas cromatográficas: cromatografía de metal quelado, afinidad por anticuerpo y afinidad por sustrato (caseína).  Los resultados se analizaron por determinación de concentración de proteínas totales,  por electroforesis en gel de poliacrilamida (PAGE-SDS),  por inmunoblotting y  por deteminación de actividad enzimática. Con la matriz de metal quelado se purificó parcialmente  la enzima, pero se obtuvo inactiva. El mejor resultado se obtuvo con la matriz de afinidad por sustrato . La actividad específica del extracto original y la fracción purificada por esta columna  fueron respectivamente  de 4 10-4  UI/mg y  de  0,23 UI/ mg lo que corresponde a una  purificación aumentada de 575 veces