Estudio de la actividad de hidrolizados de caseína sobre la proliferación de células de insecto en cultivo

REY F, LUQUE EH, CLAUS JD

UNR, Rosario

Jornada; IX Jornadas de jóvenes investigadores de la Asociación de Universidades del Grupo Montevideo (A.U.G.M); 2001

Asociación de Universidades del Grupo Montevideo

La importancia de los cultivos de células de animales invertebrados radica en la utilización de los baculovirus (virus patógenos específicos de invertebrados) como vectores de expresión de proteínas recombinantes. Para que un cultivo de células resulte viable y funcional, el medio donde se desarrolla debe acondicionar favorablemente las características del entorno fisicoquímico, proveer los nutrientes y factores necesarios para la supervivencia, multiplicación y funcionalidad celulares. Los medios basales requieren suplementos para soportar la multiplicación y funcionalidad celulares. El más utilizado es suero fetal bovino (SFB) que provee numerosos factores esenciales para las células. Sin embargo, su utilización incorpora numerosos inconvenientes: costo, composición variable, fuente de contaminación, interferencia en procesos a gran escala, lo que llevó al desarrollo de diversas formulaciones libres de suero, que deberían aportar funciones equivalentes a las obtenidas con SFB, obviando sus desventajas. Los hidrolizados de proteína son utilizados como suplemento para el cultivo de células de insecto, siendo los más usados de origen animal: hidrolizado de lactoalbúmina, hidrolizado de caseína, caldo triptosa e hidrolizados de proteínas de carne vacuna. Éstos son fuente de aminoácidos libres y modificadores de la proliferación celular, probablemente por péptidos, productos de la hidrólisis enzimática. En primera instancia se analizó la influencia de dos condiciones de cultivo, la concentración de suero fetal bovino y la densidad celular, sobre el efecto de la suplementación con un hidrolizado enzimático de caseína en la proliferación de una línea de células de insecto. Los resultados obtenidos demuestran que la actividad del hidrolizado decrece con el aumento de la concentración de suero, y con el incremento en la densidad celular. Por lo tanto, la sensibilidad del sistema para detectar la actividad estimulante de los hidrolizados de caseína sobre la proliferación celular es máxima en ausencia de suero fetal bovino y a baja densidad celular. Estas condiciones de ensayo fueron utilizadas para evaluar la actividad de hidrolizados de caseína de distinto origen, algunos enzimáticos y otros ácidos, éstos últimos con diferente nivel de hidrólisis. Todos los hidrolizados enzimáticos demostraron ser activos, mientras que los hidrolizados ácidos totales resultaron inactivos. Un hidrolizado ácido parcial resultó también activo. Estos resultados podrían indicar que la actividad estimulante de la proliferación de células de insecto requiere de la preservación de la estructura de péptidos presentes en los hidrolizados enzimáticos o ácidos parciales, y ausentes en los hidrolizados ácidos totales