Caracterización del Caiman latirostris como centinela de contaminación ambiental: Inducción de vitelogenina como indicador de exposición a xenoestrógenos

STOKER C, REY F, RAMOS JG, SIROSKI P, LUQUE EH, BUSSMANN L, MUÑOZ DE TORO MM

Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas, UNL. Santa Fe

Congreso; XXIV Congreso argentino de química 2002; 2002

Asociación Química Argentina

La selección de especies centinelas y de biomarcadores es crítica para el diseño de estrategias de evaluación de contaminación ambiental. La vitelogenina (Vtg) es una fosfoglicolipoproteína de alto peso molecular que, en condiciones normales, es sintetizada por el hígado de hembras ovíparas en respuesta a estrógenos (Eg). También puede ser sintetizada por machos expuestos a Eg constituyéndose en un biomarcador para evidenciar acción de xenoestrógenos. Trabajos previos han demostrado la utilidad de la determinación de Vtg en tortugas como centinelas de contaminación ambiental por xenostrógenos El Caiman latirostris (yacaré overo), especie silvestre de amplia distribución en el Litoral argentino, posee niveles detectables de Vtg durante su ciclo reproductivo. Estas características lo hacen un posible organismo centinela de exposición a xenoestrógenos. Nuestro objetivo fue comparar la inducción de Vtg entre yacarés y tortugas (Phrynops hylarii) machos aplicando un protocolo con bajas dosis de E2. Se usaron machos juveniles de yacaré (~1,75 kg) y tortuga (~0,80 kg) inyectados sc con dos dosis de E2 (1mg/g bw) con 7 días de diferencia. Los controles recibieron vehículo (aceite de sésamo). Se tomó muestra de sangre al inicio del tratamiento, a los 7 días y a los 14 días. Se usaron tubos heparinizados y aprotinina (0,0175 TIU/ml de sangre) como inhibidor de proteasas. El plasma se separó centrifugando 5 min a 4ºC y 2500g y se guardó a –80ºC. Las proteínas inducidas se estudiaron en geles discontinuos en gradiente de poliacrilamida (7-12%) bajo condiciones desnaturalizantes. Las muestras (basal, día 7 y 14) fueron sembradas en cantidades conocidas y constantes (20 mg). En todos los geles se corrió una muestra para control positivo interensayo y el estándar de peso molecular (Full Range Rainbowâ, Amershamâ). Los geles se tiñeron con Coomassie blue y con Stains All (identifica proteínas fosforiladas). Para cuantificar la inducción de Vtg, los geles teñidos con Coomassie blue fueron scaneados en 300 dpi (ScanJet ADF, Hewlett Packardâ) y la densidad óptica integrada (DOI) de las bandas de Vtg fue evaluada con un analizador de imágenes (Imag-Pro Plusâ 3.0). No se observó inducción de Vtg en los controles. Sin embargo, en los machos de yacaré y tortuga tratados con E2, los valores de DOI muestran una baja inducción de Vtg a los 7 días de la primera dosis en ambas especies (yacaré: 0,30±0,10; tortuga: 0,55±0,50), y una respuesta significativamente mayor a los 7 días de la segunda dosis (yacaré: 2,71±0,76; tortuga: 2,72±0,82). En los machos de ambas especies el umbral de inducción de Vtg es bajo y se observa una respuesta de priming a la segunda inyección de E2, lo que indica que este bioensayo sería sensible para el monitoreo de xenoestrógenos en la naturaleza. La comparación de las curvas de inducción de Vtg en tortugas y yacarés demuestra que ambas especies responden al Eg con sensibilidad equivalente. Estos resultados muestran que el yacaré overo es un monitor biológico altamente sensible para evaluar contaminación ambiental por xenoestrógenos