Vitelogenina como biomarcador de contaminación por xenoestrógenos: Producción y caracterización de un anticuerpo para detección de vitelogenina de yacaré overo (Caiman latirostris)

REY F, RAMOS JG, STOKER C, RODRÍGUEZ H, BUSSMANN L, LUQUE EH, MUÑOZ DE TORO M

Mar del Plata

Congreso; XLVIII Reunión Anual de la SAIC (Sociedad Argentina de Investigación Clínica); 2003

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

Los xenoestrógenos pueden interferir con la homeostasis del sistema endocrino. Tanto la actividad agroindustrial como los desechos urbanos generan xenoestrógenos que contaminan el ambiente. El desarrollo de metodologías para evaluar contaminación de los sistemas hídricos y la caracterización de especies centinelas para detectar exposición a xenoestrógenos, son de fundamental importancia. La vitelogenina (Vtg) es una fosfoglicolipoproteína producida en el hígado de especies ovíparas en respuesta a estrógenos. Resultados previos indican que machos de Caiman latirostris sintetizan Vtg en respuesta a bajas dosis de 17b estradiol (E2). Nuestro objetivo fue desarrollar un método de detección de Vtg de yacarés y profundizar la caracterización de esta especie como centinela de contaminación por xenoestrógenos. Obtuvimos Vtg de plasma de hembras expuestas a altas dosis de E2. La Vtg se identificó en geles de poliacrilamida por tinción con Coomassie blue y Stains all y se purificó por precipitación con MgCl2 seguida por cromatografía de intercambio iónico. La fracción purificada se sembró en geles de poliacrilamida y se transfirió a membranas de nitrocelulosa. Para la producción del anticuerpo anti-Vtg se inocularon conejos con la fracción de nitrocelulosa pulverizada. En Western blot y utilizando estándar purificado, el anticuerpo generado mostró alta sensibilidad detectando Vtg en el orden de 0.01mg. y alta linealidad (0 a 0.64 mg de Vtg, r2: 0.918). Usando plasmas de yacarés machos y hembras en condiciones basales y postestimulación con E2, el anticuerpo mostró alta especificidad, resultando adecuado para evaluar bajos niveles circulantes de Vtg. Los resultados obtenidos profundizan la caracterización de Caiman latirostris como centinela de contaminación por xenoestrógenos