Detección de marcadores inmunoendocrinos en biopsias de endometrio de vacas lecheras: posible relación con la susceptibilidad a infecciones uterinas

PERALTA MB; GAREIS NC; MACIEL M; SCANDOLO LUCINI D; ORTEGA HH; SALVETTI NR; REY F; VELÁZQUEZ MML

Congreso; X Reunión Argentina de Patología Veterinaria (RAPAVE); 2016

La intensificación en la producciónlechera, tanto individual como por unidad de superficie, y el incremento en laproducción individual está generando una mayor incidencia de enfermedadesmetabólico-nutricionales y de cambios inmunológicos que interactúan con lasanteriores (Giuliodori et al., 20131). El objetivo del presentetrabajo fue identificar marcadores inmunoendocrinos a nivel endometrial,en vacas primíparaso multíparas, con el fin de estudiar su relevancia como indicadores molecularesdel estado inmunológico que reflejen una susceptibilidad a posibles infeccionesuterinas.Para ello se tomaron biopsias uterinassegún la técnica descripta por Chapwanya et al., (2010), de vacas lecheras dela raza Holando Argentino ginecológicamente sanas, teniendo en cuenta elmomento del ciclo estral (diestro). Los grupos estudiados consistieron enanimales de primera lactancia (n = 3) y de dos o más lactancias (n = 4). Lasmuestras de tejido obtenidas se fijaron en formol bufferado al 10% durante 6-8h a 4°C y se procesaron histológicamente siguiendo protocolos de rutina hasta suinclusión en parafina. Se efectuaron cortes seriados, de 4 μm de espesor destinadosa las diferentes evaluaciones. Para la caracterización inicial se utilizó lacoloración de hematoxilina-eosina. Los marcadores de interés estudiados en estainstancia fueron el receptor de progesterona (PR), mediador de la accióninmunosupresora de la progesterona, y los factores de crecimiento transformanteb1(TGF b1),TGF b2 yTGF b3. Lasinmunodetecciones se efectuaron mediante inmunohistoquímica indirecta empleandoanticuerpos específicos. La reacción se reveló utilizando 3,3' diaminobencidinacomo cromógeno y se realizó coloración de contraste con hematoxilina.Finalmente se digitalizaron imágenes microscópicas para analizarlas con elsoftware Image-Pro Plus 3.0.1 (Media Cybernetic) siguiendo métodos yadescriptos (Ortega et al., 20072). Los resultados se analizaron através de pruebas estadísticas no-paramétricas empleando el programa SPSS 10.1(SPSS Inc. USA).Los resultados obtenidos demostraron quelos marcadores inmunoendocrinos estudiados se expresan en epitelio luminal, en epitelioglandular y en estroma endometrial de vacas en lactancia. La expresión de PR nomostró diferencias significativas al comparar los niveles en epitelio glandulary estroma entre vacas primíparas y pluríparas (p>0,05). Asimismo, similaresniveles de expresión fueron determinados para los marcadores TGFb1,TGF b2 yTGF b3 endichos estratos celulares. Para el epitelio luminal, no fue posible obtener informacióncuantitativa debido al reducido número de imágenes obtenidas que contaran condicha porción de tejido hasta ese momento. Sin embargo, para el caso de PR yTGF b3,una observación cualitativa de los resultados permitió identificar una intensa expresiónen epitelio luminal en relación a lo observado en el estroma de la mismabiopsia. Por el contrario, dichas diferencias en la intensidad de marcación nofueron notables para TGF b1 y TGF b2 entre dichos estratoscelulares.Con estas primeras determinaciones y en función de losresultados descriptos, se pudo confirmar que los marcadores inmunoendocrinosestudiados se expresan en todos los estratos celulares a nivel endometrial duranteel diestro tanto en vacas primíparas como en pluríparas sanas. Esto indicaríaque los parámetros evaluados podrían ser utilizados para determinar posiblesalteraciones en la capacidad de respuesta inmunológica, ampliamente descripta paraanimales con altas exigencias metabólicas/nutricionales. De esta manera, estasexigencias podrían verse reflejadas en la expresión de citoquinas con funciónreguladora, tales como TGF b1, TGF b2 yTGF b3 estudiadas así como de otras, y en presencia del receptorde progesterona a nivel endometrial.