Expresión del receptor tipo I del factor de crecimiento análogo a insulina en ovarios de animales con enfermedad quística ovárica bovina

COLOMBERO M; RODRÍGUEZ FM; MATILLER V; BENITEZ GA,; ORTEGA HH; REY F

Jornada; XIII Jornadas de Divulgación Técnico-Científicas 2012 de la Facultad de Ciencias Veterinarias-UNR; 2012

La Enfermedad Quística Ovárica (COD) es uno de los desórdenes reproductivos más frecuentes en vacas lecheras. Los quistes foliculares afectan a las vacas de alta producción durante el posparto, prolongando el período parto-concepción y ocasionando pérdidas significativas en la producción pecuaria (4). La progresión a través de los sucesivos estadios de desarrollo folicular se encuentra regulado a nivel endocrino y local donde se destaca la participación activa del sistema de IGFs, regulando el desarrollo y funcionalidad folicular, sea sólo o en sinergia con las gonadotrofinas (1). Dicho sistema está compuesto por dos ligandos (IGF1 e IGF2), 6 proteínas de unión (IGFBPs), IGFBP-proteasas específicas y dos receptores (IGFR-I e IGFR2). El receptor tipo 1 (IGFR1) es un receptor de tipo tirosin-quinasa que se une con alta afinidad al IGF-I y en menor grado a IGF-II (2).. La hipótesis del presente trabajo considera que el IGF-I y sus receptores (IGFRs) cumplen funciones determinantes en la regulación del desarrollo folicular, por lo tanto se podría postular que ejercen un rol fundamental en la patogénesis de la COD. Es por ello que en nos propusimos evaluar la expresión proteica de IGFR1 en quistes foliculares espontáneos provenientes de animales a campo, inducidos experimentalmente y en folículos controles. Se utilizaron muestras de vacas con quistes espontáneos obtenidas a campo (n=10), y muestras de animales experimentales, cuyos ciclos estrales fueron sincronizados previamente, y luego divididos en dos grupos. En uno de ellos, se indujo la enfermedad por medio de la administración de ACTH (n=5), y el otro se mantuvo como grupo control (n=5). Luego de la confirmación del desarrollo de quistes por ultrasonografía se realizó la ovariectomía y se obtuvieron muestras de ovarios (2) que fueron fijadas en formaldehído bufferado 4% y procesadas según protocolos de rutina hasta inclusión en parafina. Se efectuaron cortes de 4 mm de espesor, sobre los que se realizó la técnica de inmunohistoquímica indirecta específica para IGFR-I. Se realizó recuperación antigénica con buffer citrato (pH 6) en microondas, la inactivación de la peroxidasa endógena con agua oxigenada en metanol 1% y el bloqueo de uniones inespecíficas con suero normal de cabra y se incubó con el anticuerpo primario específico. El revelado se realizó utilizando un anticuerpo secundario biotinilado y la reacción se visualizó utilizando 3,3' diaminobencidina como cromógeno. Se evaluó la inmunomarcación en células de la granulosa y de la teca durante el crecimiento folicular y en estructuras quísticas sobre imágenes digitalizadas utilizando el programa de análisis de imágenes Image Pro-Plus 3.0. Se midió el porcentaje de área inmunomarcada para cada capa folicular y las diferencias obtenidas se analizaron estadísticamente con el programa SPSS para Windows 11.0.1. La expresión de IGFR1 fue significativamente mayor en folículos terciarios y quistes, con respecto a las demás estructuras foliculares ( 37,32 ± 1,57 vs 9,89 ± 0,53, p<0.05). En todos los estadios foliculares analizados se observó una menor marcación en estructuras provenientes de COD inducida con respecto a los folículos provenientes de COD espontánea (25,86± 2,53 vs 37,32 ± 1,57, p<0.05). Los resultados obtenidos determinaron que el IGFR1 no se expresó en células de la teca, mientras que en células de la granulosa, se observó expresión en la membrana celular en todas las estructuras foliculares analizadas. Se determinó un patrón de marcación creciente a medida que aumenta el desarrollo folicular. Teniendo en cuenta que previamente en nuestro laboratorio observamos una disminución en la expresión de IGF1 en animales con COD (3) y basados en los resultados obtenidos en este trabajo, podríamos inferir que un aumento en la expresión de IGFR1 estaría relacionado a un incremento en las posibilidades de captar las menores concentraciones de IGF1 presentes en situaciones de animales con COD, indicando así un posible mecanismo de regulación intrafolicular del crecimiento folicular y el posible desarrollo de la enfermedad. De esta manera, los resultados obtenidos en el presente trabajo apoyan la hipótesis de un rol fundamental del sistema IGF, ayudando a una mejor comprensión acerca de su participación en el desarrollo de la enfermedad.