Variaciones en la expresión de IGF-I y II luego de la aplicación de Panax ginseng al momento del secado

PUJATO S; CADOCHE MC; BARAVALLE C; CALVINHO LF; REY F; DALLARD BE

Esperanza, Santa Fe

Jornada; XII Jornada Nacional de Divulgación Técnico Científicas, Facultad de Ciencias Veterinarias UNR-UNL; 2011

Durante el periodo de secado se produce el proceso de remodelación mamaria, que incluye la regresión (apoptosis), proliferación y diferenciación de las células mamarias. La ausencia de un periodo de secado puede reducir la producción láctea hasta en un 20%, por lo que toda influencia sobre los mecanismos de remodelación mamaria que contribuya a acelerar el proceso de involución durante el periodo de secado podría incidir en el aumento de la producción en la lactancia subsecuente. Durante el periodo no lactante se originan infecciones intramamarias (IIM) que pueden reducir la producción láctea hasta en un 30% comparando con cuartos mamarios no infectados. Tradicionalmente, el control de las IIM durante el periodo de vaca seca se realiza con antibióticos de acción prolongada. Las limitantes de esta práctica, debido a la generación de residuos en leche y resistencia bacteriana entre otras, han motivado la búsqueda de nuevas alternativas de control. En este sentido, en nuestro laboratorio, hemos contemplado la utilización de extracto de Panax ginseng (PG) al momento del secado como una alternativa a los métodos convencionales de control de las IIM en bovinos. Los resultados obtenidos han demostrado que la inoculación intramamaria (IM) de PG, estimula de manera significativa la expresión de citoquinas proinflamatorias en leche y en tejido mamario durante la primera semana de la involución, comportándose como un estimulante de las defensas innatas del huésped (1). Por otra parte, hemos comprobado que acelera el proceso de involución mamaria a través de una intensa remodelación del tejido, aumentando en forma significativa la apoptosis, sin alterar la proliferación celular (2). Se ha descripto que el sistema de factores de crecimiento análogos a insulina (IGFs) regula la apoptosis en la glándula mamaria, por lo que en el presente trabajo nos proponemos como objetivo general realizar una valoración cualitativa y semicuantitativa de los patrones de expresión de las proteínas IGF-I e IGF-II en tejido mamario identificando posibles modificaciones tras la inoculación de PG durante la involución temprana. Se utilizaron 6 vacas Holstein no preñadas en la etapa final de la lactancia. La unidad experimental fue el cuarto mamario. Del total de cuartos disponibles, 8 fueron inoculados con 10 ml de una solución de extracto de PG (3 mg del extracto seco/ml), 8 con 10 ml de placebo (solución fisiológica) y 8 fueron mantenidos como controles (libres de inoculación). Los animales fueron secados luego de la inoculación y se sacrificaron a los 7 días. Se obtuvieron muestras de tejido de tres zonas de la glándula mamaria, las cuales se procesaron mediante técnicas histológicas de rutina hasta la obtención del taco de parafina. Cortes de 4 μm de espesor fueron sometidos a técnicas de IHQ indirecta, utilizando anticuerpos específicos para la detección de IGF-I y -II. La semicuantificación de la expresión de ambos factores de crecimiento se realizó mediante análisis digital de imágenes utilizando el programa Image Pro-Plus 3.0.1®. Las diferencias entre los tratamientos fueron analizadas mediante el test no paramétrico Kruskal-Wallis, seguido de Bonferroni como test de comparaciones múltiples utilizando el software Statgraphics Plus 5.1. La expresión de IGF-I y -II se asoció fundamentalmente a estructuras del parénquima mamario, observándose una reacción intensa a la marcación en el epitelio que reviste alvéolos y conductos mamarios. Células del estroma como fibroblastos, macrófagos y células endoteliales de los vasos sanguíneos mostraron marcación positiva en el citoplasma. En cuartos mamarios inoculados con PG a los 7 días del secado, se observó una disminución significativa en los porcentajes de área inmunomarcada para IGF-I en comparación con los cuartos tratados con placebo y con los cuartos que no recibieron ningún tratamiento (p<0.05). Los porcentajes de marcación para IGF-II fueron similares en todos los grupos experimentales evaluados (p>0.05). Trabajos previos han demostrado que IGF-I es un factor mitogénico que promueve la supervivencia de las células retrasando la involución de la glándula mamaria. Los resultados obtenidos en el presente trabajo revelan que la inoculación IM de PG al momento del secado disminuye la expresión de IGF-I contribuyendo en la aceleración del proceso de involución temprana. Por otra parte, la expresión de IGF-II no mostró diferencias entre los tratados con PG y los controles lo que podría sugerir que la dosis del extracto utilizada no fue suficiente para estimular una mayor expresión de esta proteína. Sumado a este resultado, publicaciones previas han reportado una menor participación de este factor de crecimiento en el proceso de remodelación mamaria durante la involución.   (1) Baravalle, C.; Dallard, B.E.; Ortega, H.H.; Neder, V.E.; Canavesio, V.R.; Calvinho, L.F. Effect of Panax ginseng on cytokine expression in bovine mammary glands at drying off. Vet Immunol. Immunopathol. 138:224-230, 2010. (2) Dallard, B.E.; Baravalle, C.; Andreotti, C.; Ortega, H.H.; Calvinho, L.F. Intramammary inoculation of Panax ginseng extract on cows at drying off enhances early mammary involution. J. Dairy Res. 78:63-71, 2011.