Influencia del componente de la cascada de señalización de la insulina, PI3K (fosfatidilinositol-3-kinasa), en la enfermedad quística ovárica bovina

PANZANI CG; RODRÍGUEZ FM; BENÍTEZ G; SALVETTI NR; ORTEGA HH; REY F

Esperanza, Santa Fe

Jornada; XII Jornada Nacional de Divulgación Técnico Científicas, Facultad de Ciencias Veterinarias UNR-UNL; 2011

La Enfermedad Quística Ovárica (COD) es uno de los desórdenes reproductivos más frecuentes en vacas lecheras. Los quistes foliculares afectan a las vacas de alta producción durante el período post-parto, prolongando el intervalo parto-parto, parto-concepción y provocando pérdidas significativas en la producción pecuaria (4). Además, en numerosos casos, los quistes normalmente son acompañados por la expresión de conducta sexual receptiva (estro), resultando en costos adicionales por las infructuosas inseminaciones artificiales realizadas. El desarrollo y el crecimiento folicular ovárico son regulados por las gonadotrofinas hipofisarias, hormona folículo estimulante (FSH), la hormona luteinizante (LH), y por factores locales tales como las hormonas esteroides y factores de crecimiento. La insulina constituye un factor relacionado con el metabolismo, siendo determinante para el desarrollo folicular ovárico de los mamíferos, en concomitancia con las gonadotropinas pituitarias. Así, para obtener una respuesta celular específica y coordinada en la estimulación por insulina se requiere de la integración de una completa red de procesos de señalización intracelular. De esta manera, en la mayor parte de los efectos metabólicos mediados por insulina, la regulación por la activación de la vía de la fosfatidilinositol-3-quinasa (PI3K) cumple un rol fundamental (1). En este trabajo nos hemos propuesto evaluar los perfiles de expresión de PI3K en diferentes poblaciones celulares de folículos ováricos. Se utilizaron muestras provenientes de animales controles cuyos ciclos estrales fueron previamente sincronizados y no fueron sometidas a ningún tratamiento. Las muestras de animales con COD fueron obtenidas en forma experimental induciendo quistes por acción de ACTH (2), y de animales con COD espontánea obtenidas en playa de faena. Las muestras de ovarios obtenidas fueron fijadas en formol buffer (4%) durante 8hs, lavándose luego con buffer fosfato salino (PBS) y siguiendo el procesamiento según protocolos de rutina hasta la inclusión en parafina. Luego se efectuaron cortes seriados de 4 mm de espesor, sobre los que se realizó la técnica de inmunohistoquímica indirecta con anticuerpos específicos para la detección de PI3K. Se realizó la recuperación antigénica en buffer citrato (pH6) en horno microondas, la inactivación de la peroxidasa endógena con agua oxigenada en metanol y el bloqueo de uniones inespecíficas para una posterior incubación con el anticuerpo primario específico. La reacción fue evidenciada incubando con un anticuerpo secundario biotinilado, seguido de la unión de streptavidina-peroxidasa y posterior reacción con el cromógeno 3,3´ diaminobencidina. La formación de un precipitado marrón evidenció una reacción positiva que fue evaluada en células de la granulosa y de la teca durante el crecimiento folicular y en estructuras quísticas (3). Los resultados mostraron una intensa marcación en las células de la granulosa sin obtener diferencias significativas entre las distintas estructuras foliculares evaluadas. Sin embargo, en las células de la teca detectamos un aumento significativo de la marcación en los quistes provenientes de animales con COD inducida con respecto a los folículos terciarios de animales con la enfermedad. Estos resultados serían consistentes con una amplificación excesiva de la señalización de insulina en quistes, la cual podría tener un rol importante en los mecanismos de regulación y proliferación de los mismos. (1) Kahn CR, White MF The insulin receptor and the molecular mechanism of insulin action. J Clin Invest. 82:1151-1156, 1988. (2) Ortega, H.H.; Palomar, M.M.; Acosta, J.C.; Salvetti, N.R.; Dallard, B.E.; Lorente, J.A.; Barbeito, C.G.; Gimeno, E.J. Insulin-like growth factor I in ovarian follicles and follicular fluid of cows with spontaneous and induced cystic ovarian disease. Res Vet Sci. 84:419-427, 2008 (3) Salvetti NR, Gimeno EJ, Lorente JA, Ortega HH. Expression of cytoskeletal proteins in the follicular wall of induced ovarian cysts.Cells Tissues Organs.178:117-125, 2004 (4) Silvia, WJ; Alter, TB; Nugent, AM; Laranja da Fonseca, LF. Ovarian follicular cysts in dairy cows: an abnormality in folliculogenesis. Domest. Anim. Endocrinol. 23:167-177, 2002.