Participación de las proteínas de unión a IGF (IGFBPs) en el desarrollo de la enfermedad quística ovárica bovina

RODRÍGUEZ FM; PANZANI CG; COLOMBERO M; SALVETTI NR; BARBEITO CG; ORTEGA HH; REY F

Esperanza, Santa Fe

Jornada; XII Jornada Nacional de Divulgación Técnico Científicas, Facultad de Ciencias Veterinarias UNR-UNL; 2011

La enfermedad quística ovárica (COD) es un desorden reproductivo muy frecuente durante el período posparto en el ganado bovino lechero. Se caracteriza por la persistencia de una estructura folicular anovulatoria (mayor a 20 mm) ocasionando trastornos en la función del ovario. La presencia de quistes en hembras de alta producción conduce a un incremento en los intervalos parto – concepción y parto- parto, resultando en importantes pérdidas económicas (3). El desarrollo folicular ovárico está regulado tanto por mecanismos intraováricos como endocrinos, autocrinos y paracrinos que coordinan la proliferación y diferenciación celular, donde el sistema IGF posee un rol esencial. Dicho sistema participa en la regulación del desarrollo folicular y la esteroidogénesis, generalmente en sinergia con las gonadotrofinas (4) y se ha descrito que está involucrado en la selección del folículo dominante, así como en el proceso de ovulación, formación del cuerpo lúteo y la atresia (1). El sistema IGF está formado por dos ligandos, IGF-I y –II, estructuralmente similares a la insulina; dos receptores, el tipo 1 (IGFR-1) y el receptor tipo 2 (IGFR-2) que median los efectos de sus ligandos y una familia de proteínas de unión (IGFBP-1 a -6) que unen los ligandos con alta afinidad y pueden inhibir o potenciar la acción de los mismos, regulando así, la biodisponibilidad de los IGFs (2). Se cree que cambios en la expresión de las IGFBPs, acoplado con cambios en la actividad de proteasas específicas, proveen un mecanismo regulatorio de la biodisponibilidad de los IGFs durante la foliculogénesis (1). En el presente trabajo nos hemos propuesto evaluar los perfiles de expresión de IGFBPs (específicamente IGFBP-2, -3, -4 y -5) en diferentes poblaciones celulares de folículos provenientes de animales controles y con COD. Para ello, se utilizaron muestras de ovarios que fueron fijadas en formaldehído bufferado (4%), y procesadas según protocolos de rutina hasta la inclusión en parafina. Luego se efectuaron cortes de 4 mm de espesor, sobre los que se realizó la técnica de inmunohistoquímica indirecta utilizando anticuerpos específicos para las IGFBPs a estudiar. Se realizó recuperación antigénica con buffer citrato (pH 6) en microondas, la inactivación de la peroxidasa endógena con agua oxigenada en metanol y el bloqueo de uniones inespecíficas con suero normal de cabra y se incubó con el anticuerpo primario específico. El revelado se realizó utilizando un anticuerpo secundario biotinilado y la reacción se visualizó utilizando 3,3' diaminobencidina como cromógeno. Se evaluó la inmunomarcación en células de la granulosa y de la teca durante el crecimiento folicular y en estructuras quísticas utilizando un programa de análisis de imágenes (Image Pro-Plus 3.0). Las IGFBPs estudiadas se expresaron en ambas poblaciones celulares evaluadas y no se observaron diferencias en los niveles de expresión en células de la teca de los folículos de los grupos estudiados. Para la expresión de IGFBP-2, -3 y -4, no se observaron diferencias significativas (p<0,05) entre los folículos de animales del grupo control. Sin embargo para IGFBP-5, se observaron diferencias significativas (p<0,05) entre las estructuras foliculares en crecimiento de animales controles y en animales con COD. Estos resultados indican que la expresión de las IGFBPs disminuye durante el crecimiento folicular y el desarrollo del quiste, por lo que el IGF quedaría disponible para unirse a sus receptores en la célula blanco y estimular el crecimiento del folículo. Podemos concluir con estos resultados y estudios previos que alteraciones en las IGFBPs afectarían la biodisponibilidad de los IGFs. Las células foliculares podrían modificar su respuesta a las gonadotrofinas alterando el crecimiento y función normal folicular, con potencial intervención en el desarrollo de la enfermedad quística ovárica bovina.  (1)Kwintkiewicz, J; Giudice, LC. The interplay of insulin-like growth factors, gonadotropins, and endocrine disruptors in ovarian follicular development and function. Semin Reprod Med 27:43-51. 2009 (2)Rey, F; Rodríguez, FM;  Salvetti, NR;  Palomar, MM;  Barbeito, CG; Alfaro NS; Ortega, HH. Insulin-like growth factor-II and insulin-like growth factor-binding proteins in bovine cystic ovarian disease. J. Comp. Pathol. 142:193-204, 2010. (3)Silvia, WJ; Alter, TB; Nugent, AM; Laranja da Fonseca, LF. Ovarian follicular cysts in dairy cows: an abnormality in folliculogenesis. Domest. Anim. Endocrinol. 23:167-177, 2002. (4)Thomas, FH; Campbell, BK; Armstrong, DG; Telfer, EE. Effects of IGF-I bioavailability on bovine preantral follicular development in vitro. Reproduction 133:1121-1128, 2007.