INVESTIGADORES
MOLLERACH Marta Eugenia
congresos y reuniones científicas
Título:
Participación de dos bombas de eflujo en mutantes de Staphylococcus aureus resistentes a tigeciclina
Autor/es:
HERRERA M; DI GREGORIO S; FERNÁNDEZ S; POSSE G; MOLLERACH M; DI CONZA J
Lugar:
Santa Fe
Reunión:
Encuentro; 2º Encuentro de intercambio de experiencias microbiológicas del Litoral; 2016
Institución organizadora:
Asociación Argentina de Microbiología
Resumen:
Staphylococcus aureus tiene una extraordinaria habilidad para desarrollar resistencia a los antimicrobianos. Previamente hemos reportado la selección in vitro de mutantes resistentes a tigeciclina (SARTm), que mostraron un incremento de 128 veces en la CIM de tigeciclina (TIG). La actividad eflujo se evaluó determinando la CIM de bromuro de etidio (64-128 μg/ml). Además, se demostró que la CIM para ambos compuestos disminuyó en 4 o más diluciones en presencia de 20 μg /ml de reserpina, un inhibidor de bombas de eflujo. El objetivo de este estudio fue analizar la participación de dos bombas de eflujo implicadas en la expulsión de glicilciclinas y tetraciclinas (MepA y NorB) en dos SARTm analizados previamente (94159m y 2028m). Los genes de las bombas de eflujo se amplificaron por PCR y se secuenciaron. Se evaluó el nivel de expresión de los genes mepA y norB mediante RT-qPCR (retrotranscripción y PCR cuantitativa en tiempo real). Los datos fueron expresados como cantidades relativas normalizadas (NRQ) usando gyrB y pta como genes de referencia. Los ensayos fueron realizados por triplicado. El análisis estadístico de los datos se llevó a cabo usando el test de Student (α = 0,05).La secuencia de nucleótidos del gen mepA (1700pb) en las cepas parentales 94159p y 2028p mostró 100% de identidad con las correspondientes secuencias de referencia (S. aureus Nº acceso HE579073.1 y CPO12119.1). Por el contrario, en ambas cepas mutantes (94159m y 2028m) se observó una transición (C x T) en la posición 211 de la secuencia, generando una mutación Thr29Ile en la secuencia de aminoácidos traducida. Además, en 2028m se detectó una transición (A x G) en la posición 985 produciendo la mutación Glu287Gly.Los valores NRQ del gen mepA fueron significativamente mayores en ambas mutantes (94159m y 2028m) comparado con las cepas parentales (p