Evaluación de la eficiencia metabólica en aislamientos de S. aureus resistentes a tigeciclina

HERRERA M; POSSE G; MOLLERACH M; DI CONZA J

Santa Fe

Congreso; III Congreso Bioquímico del Litoral y XVI Jornadas Argentinas de Microbiología; 2015

Colegio de Bioquímicos de la Provincia de Santa Fe. Asociación Argentina de Microbiología

Previamente hemos comunicado que es posible seleccionar mutantes de S.aureus resistentes a tigeciclina por sucesivos pasajes en presencia de concentraciones subinhibitorias de este antibiótico. Esto podría ir acompañado de cambios estructurales que se traduzcan en posibles alteraciones del fitness del microorganismo.El objetivo de este estudio fue evaluar la eficiencia metabólica en mutantes de S. aureus resistentes a tigeciclina seleccionadas in vitro y comparar su comportamiento con las respectivas cepas parentales.Se estudiaron 10 aislamientos de S. aureus y sus respectivas mutantes resistentes a tigeciclina seleccionadas in vitro (SARTm). Se realizaron ensayos de curvas de crecimiento en caldo Mueller Hinton y se evaluó la cinética de muerte de los aislamientos frente a dos concentraciones diferentes de tigeciclina (1xCIM y 2xCIM). Las pendientes de las curvas de crecimiento y de muerte se compararon estadísticamente utilizando análisis de pendientes por regresión lineal del programa GraphPad. La comparación de la frecuenciamutacional entre los SARTm y sus cepas parentales se realizó por siembra del inóculo en agar Mueller-Hinton con 100 μg/mL de rifampicina (la resistencia a rifampicina está asociada a mutaciones espontaneas en el gen rpoB).Se evaluó la funcionalidad del locus agr (implicado en regulación de virulencia) a través de la expresión de δ-hemolisina en agar sangre de carnero, utilizando la cepa S. aureus RN 4220. Además, en todos ellos se determinó el grupo agr por multiplex PCR. En las cepas que perdieron la expresión de la δ-hemolisina se amplificó y secuenció una región de ≈ 1200 pb del locus agr (agrA y agrC) y se analizaron dichas secuencias mediante el software VECTOR 11.0 y BLAST.Al evaluar la velocidad de crecimiento sólo una de las cepas SARTm reveló diferencia estadísticamente significativa respecto a la cepa parental y mostró una velocidad crecimiento menor. En el estudio de la cinética de muerte 7/10 SARTm mostraron diferencias estadísticamente significativas (p