Linnocuicina 819: avances en su purificación y caracterización

MOLLERACH M; VEGA A; GUTKIND G; DE TORRES RA

Buenos Aires

Congreso; XI Congreso Lationoamericano de Microbiología; 1991

Asociación Argentina de Microbiología

El estudio del fenómeno bacteriocinogénico en el género Listeria fue iniciado utilizando la técnica de la estría perpendicular de Fredericq. Esta metodología permitió la selección de Listeria innocua 29-CCM-A 819 como probable productora de bacteriocinas y de Listeria ivanovii 29-CCM-A 818 como cepa indicadora. La sustancia responsable de la inhibición del crecimiento fue denominada Linnocuicina 819 y extraída a partir de sobrenadantes de cultivos de L. innocua en fase de crecimiento exponencial. El esquema de precipitación desarrollado incluyó precipitación salina, filtración por geles (Sephadex G 200-120, Sepharosa 4B) y cromatografía de intercambio iónico (FPLC System- Pharmacia). El diagrama de elución de Sepharosa 4B presentó 2 picos de absorbancia a 280 nm, de los cuales el primero presentó actividad inhibitoria sobre L. ivanovii. Esta fracción fue sembrada en una columna de intercambio iónico (MonoQ). La elución se realizó con un gradiente lineal de NaCl 0-1,5M, recuperándose la actividad biológica a 0.70M de NaCl. Con el objeto de detectar posibles blancos de este agente inhibitorio se estudio la influencia del estado fisiológico de distintas estructuras subcelulares y/o procesos bacterianos para el ejercicio del efecto letal de Linnocuicina. Para ello se enfrentaron con el agente en estudio cultivos de L. ivanovii pretratados o no con distintos inhibidores (azida, penicilina G, rifampicina, cloranfenicol, polimixina B, sulfametoxasol, y gentamicina). Los resultados obtenidos mostraron alteración del efecto lítico inducido por Linnocuicina sólo en células pretratadas con polimixina B y gentamicina. Esto sugeriría un requerimiento en relación al estado de la membrana o la posible inactivación de Linnocuicina por sustancias de naturaleza policatiónica.