Determinación de aminoácidos libres por Cromatografía Líquida de Ultra Alta Resolución

GONZALEZ, ROXANA; QUINTAS, PAMELA Y.; WUILLOUD, RODOLFO G.

Corrientes

Congreso; XI CONGRESO ARGENTINO DE QUIMICA ANALITICA; 2021

Asociación Argentina de Químicos Analíticos

El objetivo principal del siguiente trabajo fue desarrollar un método analítico para lograr la separación y detección de los AAs mediante RP-UHPLC-DAD (cromatografía liquida de ultra alta resolución en fase reversa acoplada a detector de arreglo de diodos), previa derivatización pre-columna utilizando FMOC-Cl. Para ello, primeramente, se estudió la influencia de diferentes variables experimentales del sistema cromatográfico, así como también, de la reacción de derivatización. Los AAs fueron derivatizados siguiendo el protocolo diseñado por Jámbor y Molnár-Perl (2009) con algunas modificaciones. En la reacción de derivatización se evaluó la concentración de concentración FMOC-Cl y su relación con los AAs. Los derivados formados en esta reacción fueron luego cuantificados mediante UHPLC-DAD. La columna utilizada fue Shimadzu-C18 (2.2 mm d.i. x 7.5 cm, 3 µm). En la separación cromatográfica se estudió: pH, concentración de solvente orgánico y temperatura. Se trabajó con un flujo de 0.40 mL/min en modo gradiente entre solvente A (ácido trifluoroacético, 0,01 % v/v) y solvente B (acetonitrilo). La temperatura de trabajo fue 40°C. Las longitudes de onda de trabajo fueron:254 nm, 262 nm y 265 nm.