CARACTERIZACIÓN DE GENES CANDIDATOS PARA RESISTENCIA A LA PODREDUMBRE HÚMEDA DEL CAPÍTULO DE GIRASOL (SCLEROTINIA SCLEROTIORUM)

LIA, VV; PELUFFO, L; HOPP, EH; VAZQUEZ ROVERE, C; PANIEGO, N; HEINZ, RA.

Foz de Iguazu

Congreso; 12º Congreso de la Asociación Latinoamericana de Genética, 52º Congresso Brasileiro de Genética; 2006

Sociedad Brasilera de Genética

Entre los principales limitantes de la producción de girasol a nivel mundial se encuentran las enfermedades fúngicas y particularmente la podredumbre húmeda del capítulo (PHC) causada por Sclerotinia sclerotiorum, ocupando un papel relevante debido a la falta de resistencia en el germoplasma comercial y la base genética compleja del carácter. A partir del análisis de las colecciones de ESTs (Fernandez y col. 2003) desarrolladas en el Instituto de Biotecnología (IB) se identificaron secuencias con similitud a genes de otras especies cuya función ha sido relacionada con respuestas y/o defensas a estreses bióticos y/o abióticos. Entre estos candidatos se seleccionaron los transcriptos correspondientes a un probable gen de oxalato oxidasa (OxOx) y un inhibidor de poligalaturonasa (PGIP) para validar experimentalmente su función biológica y evaluar su contribución a la tolerancia a PHC. El estudio previo de la  abundancia de estos transcriptos en distintas líneas de girasol permitió detectar diferencias en los niveles de expresión de estos genes claves en el proceso de invasión del hongo tanto entre materiales resistentes y susceptibles, como también  diferencias temporales y finales entre líneas resistentes lo cual podría asociarse a diferencias en la base genética de la resistencia. En el presente trabajo se describe la caracterización estructural de los genes OxOx y PGIP  a través de la obtención de la secuencia completa de los transcriptos utilizando técnicas de RACE y del análisis del número de copias mediante Southern Blot. Los resultados obtenidos confirman que ambos genes candidatos son de copia única, presentan una población de transcriptos de longitud variable (OxOx: 712-886 pb; PGIP: 1116-1157pb),  y que la totalidad de las diferencias de tamaño se restringen a la región 3´ no codificante. El análisis de la secuencia de aminoácidos correspondiente a OxOx permitió verificar la presencia de los motivos conservados característicos de las Germin y Germin-like proteins (GLPs) y predecir la existencia de un péptido señal en concordancia con lo esperado para proteínas de secreción al apoplasto. A fin de establecer la posición filogenética de la secuencia obtenida dentro de la familia de las GLPs se realizó un análisis de parsimonia incluyendo 98 representantes del grupo provenientes de diversas especies vegetales, utilizando el algoritmo de reconstrucción para matrices de gran tamaño implementado en el software TNT. Por último se realizó el relevamiento de una genoteca de cromosomas artificiales de bacterias (BACs) integrada por filtros de alta densidad (Gentzbittel et al 2002) con sondas de la región codificante de los genes candidatos, esto permitió la identificación  de 10 clones positivos para Oxox y 54 positivos para PGIP que permitirá identificar las cajas regulatorias de los genes de interés y el  mapeo físico de las regiones genómicas que los contienen. Referencias Fernández et al. BMC Genomics 2003, 4:40 Gentzbittel L et al Mol Genet Genomics. 2002, 266(6):979-87 Financiamiento Proyecto ANPCyT PAV 137 Proyecto ANPCyT PICTO ASAGIR 13165