Informe Técnico de Avance PICT-2008-01377

LAURA B. TODARO; ALEJANDRO J. URTREGER

2008-03-26/2009-04-26

Biológica

Salud humana

Balance entre objetivos y logros alcanzados: Definir cuál es la interacción existente entre la vía de señalización de los retinoides y de PKC en la regulación de la progresión maligna de líneas celulares derivadas de tumores mamarios. 1: Analizar si el tratamiento con ATRA modula la expresión y/o actividad de alguna de las isoformas de PKC. Este objetivo, se ha podido cumplir casi en su totalidad quedando estudiar más en detalle cuales son las isoformas que se activan ante el tratamiento con ATRA. 2: Analizar si existe alteración en la expresión o activación de moléculas río abajo de las PKC, cuando las células se tratan con ATRA. Se ha podido cumplir en su totalidad con este objetivo, estando en evaluación la expresión de ciclinas. 3: Evaluar si la activación de las PKCs mediante PMA, sensibilizan a las células al tratamiento con ATRA. Aún no se han ensayado el tratamiento conjunto entre ATRA y PMA, pero de los resultados obtenidos hasta el momento podemos conocer que será mejor estrategia la utilización de inhibidores farmacológicos de cada isoforma, conjuntamente con ATRA. Dado que el PMA hace disminuir la expresión de los receptores retinoides. Nos encontramos poniendo a punto este ensayo. 4: Para discriminar la participación específica de las diferentes isoformas en los efectos modulados por ATRA, se empleará el silenciamiento farmacológico o genético de distintas isoformas de PKC. Este objetivo se encuentra en desarrollo y ya se obtuvieron resultados parciales. Se han reservado lisados provenientes de cultivos tratados con diferentes inhibidores farmacológicos de PKC a fin de ensayar WB contra moléculas relacionadas al crecimiento y diferenciación. También se ha reservado RNA proveniente de monocapas tratadas de la misma manera para evaluar la expresión de los distintos receptores retinoides. 5: Evaluar si el efecto del ATRA se debe a la interacción de la PKC con los receptores retinoideos. Aquí hemos cuantificado la actividad de los receptores ante el tratamiento con activadores farmacológicos de la PKC como el PMA, utilizando un gen reportero. Nos encontramos realizando las mismas cuantificaciones cuando se utilizan inhibidores farmacológicos de cada una de las isoformas. Se están poniendo a punto el protocolo para inmunoprecipitar PKC/Receptor retinoideo. 6: Evaluar si el efecto del ATRA se produce por la unión directa del ATRA con alguna isoforma PKC en el citoplasma célula. Aun no se ha realizar. También se informó sobre la administración del subsidio en el período.