La inhibición de la proteína quinasa C Alfa (PKCa) bloquea los efectos del ácido trans-retinoico (ATRA) sobre la autorenovación y diferenciación del componente stem/progenitor de la línea mamaria murina LM38-LP

DAMIAN E. BERARDI; AGUSTINA TARUSELLI; STÉFANO M. CIRIGLIANO; MARIA I. DIAZ BESSONE; CAROLINA FLUMIAN; ELISA D. BAL DE KIER JOFFÉ; ALEJANDRO J. URTREGER; LAURA B. TODARO

Congreso; XXX Jornadas de Oncología; 2015

Instituto de Oncología "A. H. Roffo"

Objetivos: Las células stem tumorales serían responsables de la quimioresistencia de numerosos tumores mamarios, de ahí la importancia de encontrar tratamientos que inhiban su desarrollo. Previamente hemos demostrado que las mamoesferas de la línea LM38-LP expresan altos niveles de genes pluripotenciales y son capaces de regenerar el tumor M38 in vivo, indicando que las mismas están enriquecidas por células stem. Utilizando mamoesferas de LM38-LP nos propusimos estudiar el efecto del ATRA e inhibidores farmacológicos de PKCa (Gö6976) sobre la modulación de los receptores retinoides (RARs) y sus efectos sobre la autorenovación y diferenciación de las células stem. Materiales y métodos: Se utilizo la forma trans del acido retinoico y el inhibidor farmacológico de PKCa (Gö6976) para los distintos estudios. Para aislar y estudiar las células stem utilizamos la técnica de cultivo de mamoesferas. La capacidad de autorrenovación se realizo midiendo la capacidad de generar nuevas mamoesferas a partir de las mamoesferas primarias (numero de mamoesferas secundarias). Además utilizamos microscopia confocal para el estudio de la diferenciación de las células stem en cultivos 3D en Matrigel. Finalmente utilizamos la técnica de RT-PCR para medir los niveles de los receptores retinoides. Resultados: El tratamiento de las mamoesferas con ATRA indujo un aumento significativo de la formación de mamoesferas secundarias. En cambio el tratamiento con Gö6976 indujo una disminución significativa en la capacidad de autorrenovación de las células stem. Además, el bloqueo farmacológico de PKCa revirtió drásticamente el efecto del ATRA sobre el número de mamoesferas secundarias. (Número de mamoesferas secundarias: Control: 313±19; ATRA: 575±15; Gö6976: 124±29; ATRA/Gö6976: 135±11). Mediante cultivos 3D en Matrigel, observamos que el pre-tratamiento de mamoesferas con ATRA induce la formación de acinos polarizados, con presencia de lumen y actina con localización apical. La inhibición farmacológica de PKCa bloqueó completamente el efecto diferenciador del ATRA. Por RT-PCR observamos que el tratamiento con ATRA indujo un aumento del los niveles del receptor RARb2 y RARg2. Dichas inducciónes son parcialmente bloqueadas en presencia del inhibidor farmacológico de PKCa. Conclusiones: Nuestros resultados sugieren que el tratamiento con ATRA induce la autorrenovacion y diferenciación del componente stem, posiblemente a través del receptor RARg2 y RARb2, siendo fundamental la actividad de la isoforma Alfa de PKC para que ambos efectos se pueda llevar a cabo.