Efectos biológicos de la sobreexpresión de PKC delta en la línea de carcinoma ductal pancreático humana (panc1)

LAURA V. MAURO; VALERIA C. GROSSONI; ALEJANDRO J. URTREGER; LUCAS L. COLOMBO; ELISA D. BAL DE KIER JOFFÉ; LYDIA I. PURICELLI

Buenos Aires

Congreso; XXII Jornadas Multidisciplinarias de Oncología; 2006

Instituto de Oncología "A. H. Roffo"

Las PKCs son una familia de serino-treonina quinasas, receptores de esteres de forbol, cuya desregulación se asocia a la progresión tumoral. La relevancia de cada isoforma no es clara debido a su variedad y expresión diferencial. En particular, su rol en la patogénesis del carcinoma pancreático, de pobre pronóstico y resistente a la terapia convencional, es poco conocido. El objetivo del presente trabajo fue estudiar el efecto de la sobreexpresión de la isoforma novel PKC delta (PKCd) en algunas propiedades in vitro e invivo en la línea de carcinoma ductal pancreático humana (PANC-1). Mediante Western blot (Wb) se determinó que las células PANC-1 expresan constitutivamente bajos niveles de PKCd. Los clones transfectados en forma estable mostraron altos niveles de la quinasa, obteniéndose la línea PANC-PKCd. Células transfectadas con el vector vacío pMTH se utilizaron como control. También por Wb pudo comprobarse que la PKCd transfectada es funcionalmente activa ya que su estimulación con el éster de forbol PMA, provocó el aumento de la fosforilación de la molécula ERK, regulada por PKC. Los experimentos in vivo se realizaron inyectando se 6xlO6 células transfectadas y controles en ratones nude (n=10). Se vio que los tumores originados de PANC-PKCd tienen un tiempo de latencia menor (Md= 36,5) vs pMTH (Md= 66 días, p< 0,05) y un aumento significativo de su tasa de crecimiento. Por inmunohistoquímica contra Ki67 se demostró que los tumores de células con PKCd eran más proliterativos que los originados de células control. In vitro, la sobreexpresión de PKCd provocó un aumento en el n° de colonias cuando las células se hicieron crecer independientemente del anclaje en agar blando (PANC-PKCd= 11,7±1,2 vs PANC-pMTH= 8±1 colonias). Sin embargo, las PANC-PKCd no mostraron diferencias en la tasa de crecimiento en monocapa con respecto al control. Además, mediante medición con MTS, las PANC-PKCd mostraron ser 4,3 veces más resistentes que las células control al tratamiento con 6uM de doxorrubicina. También, las PANC-PKCd mostraron ser más resistentes a la muerte por deprivación de suero que las control. Los resultados demuestran que la sobreexpresión de PKCd induce en las células tumorales pancreáticas cambios asociados a un fenotipo más agresivo.