Efecto del ácido all-trans retinoico (ATRA) e inhibidores farmacológicos de la proteína quinasa c (PKC) sobre el crecimiento y autorenovación del componente stem/progenitor (SP) de la línea mamaria murina LM38-LP

DAMIAN E. BERARDI; CAROLINA FLUMIAN; MARÍA INÉS DÍAZ BESSONE; STÉFANO M. CIRIGLIANO; ELISA D. BAL DE KIER JOFFE; ALEJANDRO J. URTREGER; LAURA B. TODARO

Mar del Plata

Congreso; 58° Reunión Científica de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC); 2013

Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC)

Las células SP tumorales serían responsables de la quimioresistencia de numerosos tumores mamarios. Hemos demostrado que las mamoesferas de la línea LM38-LP, expresan altos niveles de genes pluripotenciales y son capaces de regenerar el tumor M38 in vivo. Utilizando mamoesferas de LM38-LP nos propusimos A) estudiar el efecto del ATRA sobre la expresión de PKCa y PKCd. B) estudiar el efecto del ATRA e inhibidores farmacológicos de PKCa/PKCd (Gö6976/Rottlerina) sobre la modulación de los receptores retinoides (RAR) y sus efectos sobre proliferación, autorenovación y diferenciación de las SP. Por RT-PCR determinamos que el tratamiento de las mamoesferas con ATRA durante 48h sólo indujo una disminución de los niveles de PKCa, acompañado de un aumento de RARb2 y RARg2, involucrados en diferenciación y mantenimiento de SP. La combinación de ATRA/Gö6976 por 96h redujo el crecimiento de las mamoesferas más eficientemente que cada tratamiento por separado (Diámetro a las 96 hs: Control: 176±8µm, inhibidor PKCa: 130±11µm ATRA: 129±10µm, ATRA/inhibidor PKCa: 103±5µm), mientras que la Rottlerina indujo el efecto inverso (Diámetro: 191±7µm). El tratamiento de las mamoesferas con Gö6976 redujo drásticamente la formación de mamoesferas secundarias (Número de mamoesferas secundarias: Control: 313±19; Gö6976: 124±29; Rottlerina: 373±21; ATRA: 575±15; ATRA/Gö6976: 69±21 and ATRA/Rottlerina: 392±17). Mediante cultivos 3D en Matrigel, observamos que el pre-tratamiento de mamoesferas con ATRA induce la formación de colonias organizadas con presencia de lumen. El pre-tratamiento con Gö6976 llevo a la formación de estructuras pequeñas con evidente muerte celular mientras que la Rottlerina no afecto la diferenciación de estas estructuras. Por RT-PCR observamos que sólo el tratamiento ATRA/Gö6976 indujo una disminución de los niveles de los genes pluripotenciales Nanog y Slug, en cambio, la Rottlerina indujo su aumento. Nuestros resultados sugieren que la inhibición de PKCd lleva a la proliferación del componente SP, posiblemente a través del aumento de Nanog y Slug. Además, el tratamiento de ATRA/inhibidor de PKCa, inducirían diferenciación e inhibición de la autorenovación de SP, pudiendo ser de utilidad para el tratamiento de los tumores mamarios quimioresistentes.