Efecto del acido all-trans retinoico (ATRA) e inhibidores farmacológicos de la proteina quinasa c (PKC) sobre los componentes luminales y mioepiteliales de la línea mamaria murina triple negativa LM38-LP

DAMIAN E. BERARDI; MARÍA INÉS DÍAZ BESSONE; CAROLINA FLUMIAN; STÉFANO M. CIRIGLIANO; ELISA D. BAL DE KIER JOFFE; ALEJANDRO J. URTREGER; LAURA B. TODARO

Mar del Plata

Congreso; 58° Reunión Científica de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC); 2013

Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC)

El ATRA ejerce algunos de sus efectos sobre diferenciación celular y reversión del fenotipo maligno a través de interacciones con isoformas de PKC. Previamente demostramos que el ATRA aumenta la expresión de PKCd y disminuye PKCa en la línea LM38-LP. Tanto el tratamiento con ATRA como con el inhibidor farmacológico de PKCd (Rottlerina) inhiben la proliferación arrestando las células en G1. Además, la inhibición de PKCa (Gö6976) en combinación con ATRA inhibe la proliferación induciendo apoptosis. En la línea LM38-LP, compuesta por células luminales (LEP), mioepiteliales (MEP) y stem, nos propusimos estudiar: A) La modulación de la expresión de las isoformas a y d de PKC frente al tratamiento con ATRA en los componentes LEP y MEP B) La sensibilidad de las células LEP y MEP al tratamiento combinando de ATRA con inhibidores de PKCa/d C) Si la reducción de la proliferación inducida por la inhibición de PKCd es mediada por autofagia. Por RT-PCR observamos que el tratamiento con ATRA por 48h aumento los niveles de PKCd sólo en las células LEP disminuyendo PKCa en ambas subpoblaciones. Por citometría de flujo determinamos que tanto el tratamiento con ATRA como la inhibición farmacológica de PKCa ó d por 96h disminuyen la proporción de células LEP (% MEP (CD29+/CD24-); Control: 42,3±1,06; Gö6976: 67,4±0,87; Rottlerina: 51,6±0,18; ATRA: 51,3±0,96; ATRA/Gö6976: 71,3±0,4; ATRA/Rottlerina: 42,4±0,38). Por Western Blot observamos que la inhibición de PKCd por 48h induce un aumento de la autofagia, evidenciado por el cambio en la relación LC3-II/LC3-I (corroborado utilizando un inhibidor de la bomba de protones lisosomal). Concluimos que existe una respuesta diferencial de los componentes LEP y MEP al tratamiento con ATRA mediado posiblemente por PKCd. La apoptosis inducida por inhibición de PKCa, es más importante en el componente LEP de LM38-LP y el mecanismo por el cual la inhibición farmacológica de PKCd inhibe la proliferación sería la autofagia.