Modulación de la proliferación, apoptosis y senescencia de la línea de adenocarcinoma mamario murino LM38-LP por el tratamiento combinado de Retinoides con inhibidores farmacológicos de la Proteína Quinasa C

DAMIAN E. BERARDI; MARIA I. DIAZ BESSONE; CAROLINA FLUMIAN; STÉFANO M. CIRIGLIANO; ELISA D. BAL DE KIER JOFFÉ; ALEJANDRO J. URTREGER; LAURA B. TODARO

Mar del Plata

Congreso; 57° Reunión Científica de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC); 2012

Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC)

Los retinoides (ATRA) ejercen algunos de sus efectos sobre la diferenciación celular y la reversión del fenotipo maligno a través de interacciones con distintas isoformas de la Proteína Quinasa C (PKC). En el presente trabajo estudiamos: A)- La modulación de la expresión de las isoformas a y d de PKC frente al tratamiento con ATRA (1µM) y el perfil de receptores retinoideos cuando las células son tratadas con ATRA y/o inhibidores de PKCa/d (Gö6976 2,5µM /Rottlerina 1µM) y B)- Evaluamos el efecto de la combinación de ATRA e inhibidores de PKC, sobre el crecimiento y la distribución en el ciclo celular in vitro. Utilizamos como modelo la línea mamaria murina LM38-LP compuesta por células luminales (LEP), mioepiteliales (MEP) y stem/progenitoras. Observamos por RT-PCR que el tratamiento por 48 hs con ATRA aumento los niveles de PKCd y disminuyo los de PKCa. Asimismo, el tratamiento con Gö6976 redujo los niveles del receptor RARg2, mientras que su combinación con ATRA incrementó los niveles de RARb2. Por otro lado, el tratamiento por 96 hs con ATRA, Gö6976 y Rottlerina o sus combinaciones provoco una disminución del crecimiento en monocapa (células x105: control 22±1,1; Gö6976 3,6±0,6; Rottlerina 9±0,1; ATRA 11±0,1; ATRA/Gö6976 2,3±0,03; ATRA/Rottlerina 6,7±1,3). Mediante citometría de flujo pudimos determinar que tanto el ATRA como la Rottlerina inducen un arresto en la fase G1 del ciclo, mientras que Gö6976 aumenta el porcentaje de células en la fase subG1, hecho que se correlaciona con un aumento de la apoptosis, confirmado por ensayos con Anexina V. Por ensayos de actividad b-galactosidasa y microscopía de contraste de fase, pudimos determinar que el tratamiento con ATRA induce senescencia principalmente en el componente MEP mientras que el tratamiento con Gö6976 lo hace principalmente sobre la población LEP. Concluimos que la inhibición del crecimiento celular ejercida por los retinoides sería potenciada por la reducción en expresión y/o actividad de PKCa.