Modulación de vías de señalización involucradas en la progresión maligna de tumores de pulmón por tratamiento con el péptido sintético CIGB-300

STÉFANO M. CIRIGLIANO; MARIA I. DIAZ BESSONE; CAROLINA FLUMIAN; DAMIAN E. BERARDI; ELISA D. BAL DE KIER JOFFÉ; HERNÁN FARINA; LAURA B. TODARO; ALEJANDRO J. URTREGER

Buenos Aires

Congreso; XXIX Jornadas de Oncología; 2013

Instituto de Oncología "A. H. Roffo"

Objetivos: Estudiar el efecto de CIGB-300 sobre diferentes vías de señalización intracelular reguladas por CK2 implicadas en progresión tumoral. Analizar aspectos biológicos asociados a diseminación metastásica alterados por el tratamiento con CIGB-300, analizando particularmente el crecimiento celular en tres dimensiones. Materiales y Métodos: Líneas celulares: NCI-H125 adenocarcinoma humano de pulmón de células no pequeñas. Células L, de tejido conectivo subcutáneo de ratón, transfectadas con un plásmido que sobreexpresa el factor Wnt3a. Tratamientos: monocapas subconfluentes de células NCI-H12S fueron incubadas por 24 hs con activadores de la vía canónica de Wnt o de la vía de NF-kB y fueron posteriormente tratadas con CIGB-300 o el inhibidor competitivo de CK2, TBB, como control. Preparación de extractos proteicos para WB: para estudiar la vía de Wnt, se extrajo el contenido citoplasmático empleando el detergente saponina. Para estudiar la vía de NF-kB se separaron las fracciones nucleares y cito plasmáticas, según protocolos estándar. Ensayo de genes reporteros: se utilizó un plásmido que contiene el gen de luciferasa bajo el control del elemento de respuesta a NF-kB. Cultivos 3D: los esferoides se generaron utilizando la técnica de la gota pendiente. Resultados: la activación de la vía Wnt mediante la incubación de las células NCI-H125 con medio condicionado conteniendo el factor Wnt3a indujo un importante incremento en los niveles citoplasmáticos de beta-catenina. El tratamiento con CIGB-300 fue capaz de bloquear dicho aumento confirmando que el CIGB-300 es capaz de modular la vía de Wnt, altamente involucrada en proliferación celular. Similares resultados se obtuvieron con TBB. Una significativa activación de la vía de NF-kB, medida mediante ensayos con genes reporteros, se pudo observar luego de tratar las células NCI-H125 con el éster de forbol PMA (16 nM) durante 24 hs. El tratamiento con CIGB-300 o TBB no fue capaz de inducir alteraciones en esta vía de señalización intracelular involucrada en supervivencia ya sea en condiciones constitutivas o luego de activación con PMA. Logramos desarrollar esferoides estables de células NCI-H125, que fueron capaces de crecer y mantenerse en cultivo durante al menos 14 días. El tratamiento de estos cultivos 3D con CIGB-300 indujo una significativa inhibición en su crecimiento luego de 5 días, utilizando una dosis equivalente a 1/2 o 1 IC50 (volumen promedio: 4,07x107±0,70x107 um3 vs 3,23x107±0,26x107 um3 y 2,13x107±0,35x107 um3 para 1/2 y 1 IC50 respectivamente). A partir del sexto día de tratamiento el tamaño de los esferoides se redujo drásticamente, retomando el día 8 al volumen inicial. Conclusiones: CIGB-300 afectaría vías de señalización claves en la progresión tumoral en las cuales interviene la CK2. La importante respuesta al tratamiento observada en el modelo tridimensional, que se asemeja a las condiciones de un tumor in vivo, sugiere la utilidad de esta droga para un posible abordaje terapéutico para el cáncer de pulmón.