Poblaciones de Aspergillus sección Flavi en suelo de formosa. efecto de un agente de biocontrol en los niveles de dichas poblaciones

ORTIZ, M.P; BARROS, G.; RAMIREZ, M.L.; TORRES, A.M; CHULZE, S,N,

General Cabrera, Córdoba

Jornada; XXIII Jornada Nacional de Mani; 2008

INTA- Asociación Agronomos del Sur de Córdoba

Introducción El maní (Arachis hypogaea L.) es un cultivo de importancia en la economía nacional por el volumen de producción y las divisas que se generan a través del mercado externo. Si bien el 90% de la producción de maní se concentra en la provincia de Córdoba, diversos factores como problemas fitosanitarios, climáticos y degradación de suelos, contribuyen a la búsqueda de nuevas áreas de siembra en otras provincias, entre las cuales se encuentra Formosa. Un problema fitosanitario de importancia que afecta el sistema agroalimentario maní es la contaminación precosecha y en el almacenamiento con hongos potencialmente toxicogénicos pertenecientes al género Aspergillus productores de aflatoxinas B1, B2, G1 y G2, éstas micotoxinas causan importantes pérdidas económicas por el impacto en la salud humana y animal y el rechazo o disminución de precios durante la comercialización en los mercados externos, principalmente de la Unión Europea. Diferentes estrategias se utilizan para reducir los niveles de toxina, tanto a nivel precosecha como durante el almacenamiento. El biocontrol basado en el concepto de exclusión competitiva ofrece una alternativa promisoria y ha sido utilizado con éxito en otros países como USA y Australia. Estudios previos han demostrado que en suelos de la provincia de Córdoba las especies de Aspergillus sección Flavi son genéticamente diversas y productoras tanto de aflatoxinas B y G como de ácido ciclopiazónico. En base a dichos estudios se seleccionó un potencial agente de biocontrol para reducir la infección de maní con Aspergillus sección Flavi y la acumulación de aflatoxinas. Dado la variación en los niveles de Aspergillus sección Flavi en suelos de distintas regiones donde se cultiva maní y considerando que no hay suficiente información sobre dichas poblaciones en nuevas zonas de producción en Argentina los objetivos del presente trabajo fueron: -Caracterizar las poblaciones de Aspergillus sección Flavi en una zona cultivada con maní de la provincia de Formosa. -Evaluación del efecto del agregado de un agente de biocontrol al suelo sobre la micoflora aflatoxicogénica. Metodología 1.- Caracterización de las cepas aisladas Muestreo Se obtuvieron 19 muestras de suelo de un campo comercial destinado al cultivo de maní ubicado en las Lomitas (provincia de Formosa) en el año 2007. Las mismas se tomaron en sección diagonal con sacabocados a 5 cm de profundidad a una distancia aproximada de 10-20 metros. Aislamiento e identificación El aislamiento de las cepas se realizó por el método de diseminación en placa, utilizando los medios de cultivo (DRBC) salino 3% ClNa y (DG18). Para la identificación de las mismas se siguió la metodología descripta por Pitt y Hocking (1997). Caracterización de las cepas según la producción de esclerocios Para la producción de esclerocios se utilizó el medio de cultivo agar Czapex Dox. Los esclerocios se obtuvieron por raspado de la superficie de la placa de cultivo y sucesivos lavados con agua destilada estéril conteniendo Tween 20 (100 µl/L), se secaron y posteriormente se determinó su dimensión, midiendo los mismos bajo microscopio. Las cepas fueron caracterizadas como cepa S o L de acuerdo al diámetro de los esclerocios. Perfil toxicogénico La cuantificación de las toxinas se llevó a cabo por cromatografía líquida en capa delgada (TLC).Siguiendo la metodología propuesta por Geisen (1996). 2.-Evaluación del agente de biocontrol a campo La producción del agente de biocontrol se realizó por fermentación sólida, utilizando una cepa de Aspergillus flavus (AFCHG2), no productora de aflatoxinas, ni ácido ciclopiazónico, aislada de la zona manisera de la provincia de Córdoba. Para la misma se tomó 1 ml de una suspensión conidial de 107 conidios/mL de la cepa A. flavus AFCHG2, se agregó a 500g de sustrato sólido y se incubó por 30 días a 30ºC. El agente de biocontrol se aplicó con fertilizadora al momento de la siembra a razón de 30 Kg/ha. Se utilizó un diseño de parcelas en franja con tres repeticiones. Las parcelas tratadas correspondían a un área de alrededor de 1,5 ha. y una distancia entre surcos de 0,7 m. El ensayo incluyó tratamiento y control. Las muestras de suelo se obtuvieron previa a la siembra y a los 3 meses posteriores a la misma. En cada periodo se evaluaron los niveles de Aspergillus sección Flavi y la relación cepas toxicogénicas / no toxicogéncias. Resultados y Discusión Caracterización de las poblaciones de Aspergillus sección Flavi En las muestras de suelo analizadas se observó que el nivel de inóculo de las especies de Aspergillus sección Flavi varió entre 10 y 1,4 x 103 ufc/g de suelo con una media de 381 ufc/g.  En un 97% de las muestras evaluadas se aislaron (192 cepas), siendo182 identificadas como Aspergillus flavus y 10 como A. parasiticus. Entre las cepas de Aspergillus flavus un 68% fueron cepas L, 15,4% cepas S y el 16,5% fueron cepas no productoras de esclerocios. El perfil toxicogénico de mayor a menor fue cepas S>cepas L >cepas no productoras de esclerocios. Entre las cepas de A. parasiticus, 50% de las mismas produjeron esclerocios y un 90% produjeron aflatoxinas. Es de destacar que el inóculo de Aspergillus sección Flavi nativos si bien era comparable al encontrado en suelo de la zona manisera de Córdoba, el potencial toxicogénico de las cepas era mayor. Ensayo del agente de biocontrol Se observó que la adición al suelo del agente de biocontrol al momento de la siembra, produjo cambios en la relación de cepas toxicogénicas/no toxicogénicas en comparación con el control. Después de los tres meses de aplicación, a partir de las muestras de suelo del control se aislaron 330 cepas de Aspergillus sección Flavi y la relación de cepas toxicogénicas/no toxicogénicas fue 8:2. En el suelo tratado se aislaron 463 cepas y la relación se modificó a una proporción 6:4, observándose una reducción de las cepas toxicogénicas. Este hecho es de importancia ya que un mayor número de cepas atoxicogénicas en suelo, aumentaría la probabilidad de competencia de las mismas por los sitios de infección del grano. Así, bajo condiciones predisponentes se reduciría la probabilidad de contaminación con aflatoxinas. Más estudios se llevarán a cabo a fin de optimizar los niveles del agente de biocontrol a utilizar.