Fagocitosis y muerte intracelular del patogeno oportunista Candida albicans por celulas de la glia

PERALTA RAMOS JM; MIR¨® MS; MAYOL G; FIGUEREDO CM; ICELY PA; SOTOMAYOR CE

Tucuman

Congreso; LIX Reuni¨®n Cient¨ªfica Anual de la Sociedad Argentina de Inmunolog¨ªa; 2011

Sociedad Argentina de Inmunologia

En infecciones en SNC, la gl¨ªa ejerce un rol clave en el control del pat¨®geno. A pesar de la marcada incidencia y mortalidad observada durante la neurocandidiasis, poco se conoce sobre el rol de estas c¨¦lulas frente a C. albicans (Ca). El objetivo de este trabajo fue evaluar la actividad fagoc¨ªtica y microbicida de las c¨¦lulas gliales frente a Ca. Para ello, cultivos primarios provenientes de ratones C57BL/6, compuestos en un 80% de Astrocitos (As) y un 8% por Microgl¨ªa (Mi)(FACS), se cultivaron con levaduras viables en una relaci¨®n pat¨®geno:c¨¦lula hu¨¦sped de 1:1 y 5:1 en condici¨®n basal, en presencia de opsoninas s¨¦ricas (10%) o luego de la estimulaci¨®n simultanea con TNF-¦Á fue evaluar la actividad fagoc¨ªtica y microbicida de las c¨¦lulas gliales frente a Ca. Para ello, cultivos primarios provenientes de ratones C57BL/6, compuestos en un 80% de Astrocitos (As) y un 8% por Microgl¨ªa (Mi)(FACS), se cultivaron con levaduras viables en una relaci¨®n pat¨®geno:c¨¦lula hu¨¦sped de 1:1 y 5:1 en condici¨®n basal, en presencia de opsoninas s¨¦ricas (10%) o luego de la estimulaci¨®n simultanea con TNF-¦Á C. albicans (Ca). El objetivo de este trabajo fue evaluar la actividad fagoc¨ªtica y microbicida de las c¨¦lulas gliales frente a Ca. Para ello, cultivos primarios provenientes de ratones C57BL/6, compuestos en un 80% de Astrocitos (As) y un 8% por Microgl¨ªa (Mi)(FACS), se cultivaron con levaduras viables en una relaci¨®n pat¨®geno:c¨¦lula hu¨¦sped de 1:1 y 5:1 en condici¨®n basal, en presencia de opsoninas s¨¦ricas (10%) o luego de la estimulaci¨®n simultanea con TNF-¦Á¦Á recombinante (10 ng/mL). La respuesta se evalu¨® luego de 0.5, 1, 2, 12 y 24h de incubaci¨®n con el hongo. Para la determinaci¨®n de la capacidad fagoc¨ªtica, las levaduras fueron conjugadas con FITC, los n¨²cleos coloreados con DAPI y evaluados ambos mediante microscopia de contraste de fase e IF. A partir de las 0.5h se detecto actividad fagoc¨ªtica la que fue incrementando proporcionalmente al aumentar el tiempo de incubaci¨®n (0.5, 1, 2h)(p<0,05). El uso de anticuerpos para As (GFAP+) y Mi (CD11b+) y de microscop¨ªa confocal confirm¨® la localizaci¨®n intracelular de Ca. C¨¦lulas CD11b+ presentaron un elevado grado de vacuolizaci¨®n de su citoplasma y el n¨²mero de levaduras fagocitadas por c¨¦lulas fue de 10¡À5 luego de 1h. La capacidad fungicida, evaluada mediante recuento de UFC, fue m¨¢xima a 1-2h con valores entre 79-83% para la relaci¨®n 1:1 (p<0,05). La presencia de opsoninas o TNF-¦Á no modific¨® este par¨¢metro (p=NS). Estudios a las 12 y 24h evidenciaron el crecimiento del hongo y la incapacidad de la gl¨ªa de controlar al mismo. Este trabajo demuestra la habilidad de la Mi de fagocitar y matar a Ca a tiempos tempranos y aporta el desarrollo de un modelo apropiado para evaluar la reactividad inmune glial contra este hongo. este par¨¢metro (p=NS). Estudios a las 12 y 24h evidenciaron el crecimiento del hongo y la incapacidad de la gl¨ªa de controlar al mismo. Este trabajo demuestra la habilidad de la Mi de fagocitar y matar a Ca a tiempos tempranos y aporta el desarrollo de un modelo apropiado para evaluar la reactividad inmune glial contra este hongo. fungicida, evaluada mediante recuento de UFC, fue m¨¢xima a 1-2h con valores entre 79-83% para la relaci¨®n 1:1 (p<0,05). La presencia de opsoninas o TNF-¦Á no modific¨® este par¨¢metro (p=NS). Estudios a las 12 y 24h evidenciaron el crecimiento del hongo y la incapacidad de la gl¨ªa de controlar al mismo. Este trabajo demuestra la habilidad de la Mi de fagocitar y matar a Ca a tiempos tempranos y aporta el desarrollo de un modelo apropiado para evaluar la reactividad inmune glial contra este hongo. este par¨¢metro (p=NS). Estudios a las 12 y 24h evidenciaron el crecimiento del hongo y la incapacidad de la gl¨ªa de controlar al mismo. Este trabajo demuestra la habilidad de la Mi de fagocitar y matar a Ca a tiempos tempranos y aporta el desarrollo de un modelo apropiado para evaluar la reactividad inmune glial contra este hongo. ¡À5 luego de 1h. La capacidad fungicida, evaluada mediante recuento de UFC, fue m¨¢xima a 1-2h con valores entre 79-83% para la relaci¨®n 1:1 (p<0,05). La presencia de opsoninas o TNF-¦Á no modific¨® este par¨¢metro (p=NS). Estudios a las 12 y 24h evidenciaron el crecimiento del hongo y la incapacidad de la gl¨ªa de controlar al mismo. Este trabajo demuestra la habilidad de la Mi de fagocitar y matar a Ca a tiempos tempranos y aporta el desarrollo de un modelo apropiado para evaluar la reactividad inmune glial contra este hongo. este par¨¢metro (p=NS). Estudios a las 12 y 24h evidenciaron el crecimiento del hongo y la incapacidad de la gl¨ªa de controlar al mismo. Este trabajo demuestra la habilidad de la Mi de fagocitar y matar a Ca a tiempos tempranos y aporta el desarrollo de un modelo apropiado para evaluar la reactividad inmune glial contra este hongo. ¦Á no modific¨® este par¨¢metro (p=NS). Estudios a las 12 y 24h evidenciaron el crecimiento del hongo y la incapacidad de la gl¨ªa de controlar al mismo. Este trabajo demuestra la habilidad de la Mi de fagocitar y matar a Ca a tiempos tempranos y aporta el desarrollo de un modelo apropiado para evaluar la reactividad inmune glial contra este hongo.