La infección persistente de células Vero con virus Junín no depende de la vía PI3K/Akt

LINERO, FLORENCIA; CUERVO, EUGENIA; FERNÁNDEZ BELL FANO, PABLO; CASTILLA, VIVIANA; SCOLARO, LUIS

Buenos Aires

Jornada; Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Virología; 2013

Sociedad Argentina de Virología - AAM

Investigaciones realizadas en nuestro laboratorio demostraron que el virus Junín (JUNV, Fam. Arenaviridae) estimula la vía de la fosfatidil-inositol-3-quinasa/protein-quinasa B (PI3K/Akt) en células Vero promoviendo la expresión en membrana plasmática del receptor que JUNV utiliza para adsorberse a estas células. Esta vía de señalización regula, entre otros procesos, la supervivencia y la proliferación celular. Otros virus la modulan a fin de optimizar su multiplicación retrasando la apoptosis que desencadena la infección, como así también para establecer una infección persistente del cultivo celular. Siendo el fenómeno de persistencia una característica saliente de la biología de JUNV en este trabajo se estudió la capacidad por parte de este virus de desarrollar este tipo de infección en células Vero en relación con la vía de PI3K/Akt. A fin determinar si JUNV era capaz de activar Akt (por fosforilación), modulando negativamente la apoptosis, se analizaron los niveles de núcleos apoptóticos detectados en cultivos infectados con JUNV, en forma aguda y persistente, utilizando la técnica de tinción fluorescente de Hoechst. Las células persistentemente infectadas, denominadas V3, presentaron un porcentaje de núcleos apoptóticos que no superó el 1%, similar al encontrado para células sin infectar mientras que las infectadas a una moi de 1 UFP/cél. y analizadas a las 72 h p.i. alcanzaron un 12±3 %. Este porcentaje no se incrementó al tratar a los cultivos con Ly294002, un inhibidor de la vía, sugiriendo que el modesto porcentaje de núcleos apoptóticos detectados durante la infección aguda no se debe a una modulación positiva de la vía. Por otro lado, todos los cultivos mostraron un porcentaje similar de núcleos apoptóticos al ser tratados con staurosporina 0.1µM, un inductor de apoptosis, independientemente del estadio de la infección. La modulación de esta vía no pareció estar relacionada con el establecimiento de la persistencia, ya que cuando las células infectadas se trataron con 4 esquemas de Ly294002 (0-7, 7-14, 14-21 y 21-28 días p.i.) en todos los casos el virus logró establecer persistencia. Independientemente del esquema empleado, todos los cultivos de células V3, evaluados a los 70 y 120 días p.i., presentaron una marcada expresión de la nucleoproteína viral (N), detectada por inmunofluorescencia y western blot. El tratamiento con Ly294002 de células V3, realizado a los 150 días p.i., si bien inhibió la fosforilación de Akt, no tuvo efecto sobre la síntesis de N. En las células V3 se comprobó la funcionalidad de la vía de PI3K/Akt mediante ensayos de endocitosis de transferrina marcada y de fosforilación de Akt en respuesta al tratamiento con insulina 100 nM. Los resultados encontrados indican que el establecimiento y el mantenimiento de la persistencia de JUNV en células Vero no dependen de la modulación de la vía de PI3K/Akt a pesar de que dicha vía se encuentra funcional en este tipo de cultivos.