Rol de factores celulares y proteínas virales en la traducción de los ARN mensajeros de arenavirus.

FOSCALDI, SABRINA; D´ANTUONO, ALEJANDRA; SCOLARO, LUIS; LÓPEZ, NORA

Buenos Aires

Jornada; XXXVI Reunión Científica Anual Sociedad Argentina de Virología; 2016

Asociación Argentina de Microbiología

El genoma de los arenavirus codifica para las 4 proteínas. Los ARN mensajeros (ARNm) precursores de las mismas contienen estructura Cap en su extremo 5?, pero carecen en el extremo 3? de la cola de poliadenilato (poli(A)), característica de la mayoría de los ARNm celulares. En su lugar, presentan una región 3? no codificante que puede potencialmente formar una estructura secundaria de tipo horquilla. En estudios previos demostramos que la presencia del Cap es indispensable para la traducción de los ARNm del arenavirus Tacaribe (TCRV). El objetivo de este trabajo fue estudiar la participación tanto de proteínas celulares esenciales para la traducción dependiente de Cap, como de proteínas virales, en la traducción de los ARNm virales. Para ello, se diseñaron 2 transcriptos sintéticos, uno que imita al ARN mensajero de la Nucleoproteína (NP) de TCRV (?ARNm viral?), y otro, como control, que imita al ARN mensajero de la Beta Globina humana (ARNm celular?). En ambos transcriptos sintéticos, la región codificante correspondiente fue reemplazada por la del gen de luciferasa (FLUC). Para analizar la participación del factor celular eIF4G en la traducción de ARNm de arenavirus, monocapas celulares fueron transfectadas con un plásmido que expresa la proteasa 2A (2APro) de poliovirus, que inactiva el factor, y luego con el ARNm viral o el ARNm celular. La eficiencia de traducción de ambos transcriptos fue determinada mediante la cuantificación de la actividad FLUC a las 8 hs posttransfección. Como se esperaba, las células que expresaban 2APro mostraron niveles reducidos de eIF4G, determinado mediante Western Blot. En concordancia, la traducción de ambos ARNm se vio severamente afectada (actividad FLUC menor al 8%), tanto en células murinas como humanas. Para el estudio del rol del factor eIF4E en la traducción, células humanas fueron depletadas del mismo mediante la transfección de ARNs pequeños de interferencia. Las células fueron luego transfectadas con el ARNm viral o el ARNm celular. Los resultados indicaron que la depleción de eIF4E resultó en una disminución mayor de los niveles de traducción del ARNm celular (50%) en relación al ARN viral (25-30%). Para analizar la participación de las proteínas virales en el proceso de traducción de arenavirus, células humanas, depletadas o no de eIF4E, fueron infectadas con TCRV. A las 24 hs postinfección, las células fueron transfectadas con los ARNm sintéticos y la actividad FLUC fue ensayada 8 hs más tarde. Los resultados no mostraron diferencias significativas, ya sea en células depletadas o no de eIF4E, en los niveles de traducción de ambos transcriptos en presencia o ausencia de las proteínas virales. En conclusión, en este trabajo se observó que: 1) la traducción de los ARNm de arenavirus depende de eIF4G, 2) que muestra una dependencia limitada de eIF4E y 3) que la presencia de las proteínas virales no aumenta la eficiencia de traducción de los ARNm virales.