-Caracterización de la respuesta de interferón en células persistentemente infectadas con el arenavirus Junín.

ARMIENTO, MARÍA NIEVES; CUERVO, EUGENIA; SCOLARO, LUIS

Buenos AIres

Jornada; XXXVI Reunión Científica Anual - Sociedad Argentina de Virología - AAM; 2016

Asociación Argentina de Microbiología

Objetivo: caracterizar la respuesta de interferón (IFN) en células HEK293 (riñón humano) y A549 (pulmón humano) persistentemente infectadas con el arenavirus Junín (JUNV), a nivel de su producción y la susceptibilidad del cultivo frente a dicha citoquina. Resultados previos demostraronque en células A549 la infección persistente de JUNV modula negativamente la producción de IFN a nivel de su inducción en respuesta a RNA doble cadena (poly I:C), pero no a nivel de la susceptibilidad al mismo.Metodología: la multiplicación viral se analizó a través de la técnica de UFP, y la producción de IFN mediante un ensayo biológico de protección de células Vero (riñón de mono) frente al desafío con virus de la estomatitis vesicular (VSV), contrastando con un patrón de IFN beta (Betaferón). La producción de IFN en cultivos persistentemente infectados se indujo mediante tratamiento con poly I:C, sobreinfección con JUNV e infección con virus dengue serotipo 2 (DENV-2). Como sistema biológico de control se utilizó células A-WE (células A549 persistentemente infectadas con la cepa WE del virus de la coriomeningitis linfocítica (LCMV), prototipo de los arenavirus).Resultados: las células HEK293 y A549 infectadas con JUNV presentaron dos etapas: a) infección aguda (títulos virales con valores máximos de 10E6 UFP/ml y monocapas celulares con efecto citopático (ECP) intenso) y b) infección persistente (A549: títulos virales indetectables y ausencia deECP; HEK293: títulos cíclicos que no superaron 10E4 UFP/ml asociados a un ECP moderado a intenso). Durante la etapa aguda se detectó producción de IFN con valores máximos entre 400 y 800 UI/ml, pero dichos valores resultaron indetectables durante la etapa persistente. Las células A549 yHEK293 infectadas persistentemente con JUNV (denominadas A3 y 293-3, respectivamente), al igual que las A-WE, resultaron refractarias a la sobreinfección con JUNV (títulos < 10 UFP/ml) y no produjeron IFN. Las células A3 y A-WE tampoco produjeron IFN (títulos < 20 UI/ml) cuando setrataron con poly I:C, mientras que el control de células A549 produjo IFN con títulos promedio de 100 UI/ml. Por otro lado, todas las células persistentemente infectadas A3, A-WE y 293-3 como asítambién sus controles sin infectar resultaron protegidas frente al desafío con VSV cuando se trataron con IFN beta (40 UI/ml). Al utilizar DENV-2 como inductor de IFN, todos los cultivos persistentementeinfectados produjeron IFN con títulos similares a los obtenidos en los cultivos controles (entre 400 y 800 UI/ml). En las células A3, este comportamiento se asoció con una expresión aumentada de losmensajeros de dos proteínas celulares: MDA5 (helicasa encargada de detectar ARN bicatenario) y PML (proteína supresora de tumores).Conclusiones: las células HEK293 y A549 infectadas persistentemente con JUNV no son capaces de producir IFN por sí solas o en presencia de inductores como el virus homólogo y poli I:C, pero síresponden frente a una inducción con DENV-2.