Obtención y caracterización de nanoanticuerpos contra el virus Junín, agente etiológico de la fiebre hemorrágica argentina.

LINERO, FLORENCIA; SAELENS, XAVIER; SCOLARO, LUIS

Buenos Aires

Congreso; XI Congreso Argentino de Virología, II Congreso Latinoamericano de Virología; 2015

Sociedad Argentina de Virología - Asociación Argentina de Microbiología

Introducción. La Fiebre Hemorrágica Argentina (FHA) es una zoonosisendemoepidémica de la zona central de la República Argentina, cuyoagente etiológico es el arenavirus Junín (JUNV). Esta enfermedadpresenta una mortalidad de aprox. 30% y, a pesar de ser prevenible porvacunación con la vacuna Candid#1, los niveles de cobertura en lapoblación, justifican los estudios enfocados hacia el desarrollo de unaterapia efectiva para la FHA que pueda dar cuenta de los casos en losque no se aplicó la profilaxis por vacunación. En este sentido, eltratamiento de la persona infectada con suero obtenido de enfermosconvalecientes de la enfermedad, reduce a niveles muy bajos lamortalidad (1-2%). Sin embargo, la escasa disponibilidad de suero juntocon los recaudos a considerar, en cuanto a la bioseguridad de lapreparación, dificultan su empleo.Objetivo. Este trabajo tuvo por objetivo la obtención y caracterizaciónde nanoanticuerpos, también conocidos como anticuerpos de dominioúnico o Nanobodies® (VHHs), contra JUNV. La tecnología de losNanobodies combina especificidades antigénicas únicas junto con unproceso fácil de expresión y purificación, la cual podría emplearse porlo tanto en el tratamiento de la FHA en reemplazo del suero deconvaleciente. La estructura de estos anticuerpos es similar al dominiovariable de la cadena pesada de un anticuerpo tradicional.Metodología. Los VHHs son propios de los camélidos por lo que, eneste caso, su obtención se llevó a cabo inmunizando una alpaca con unapreparación purificada de la cepa Candid#1 inactivada por luz U.V. Laespecificidad de unión de los VHHs contra JUNV (VHHs ?binders?) fueevaluada mediante un ensayo de PE-ELISA usando extractosperiplásmicos de bacterias que expresaban los VHHs y Candid#1 comoantígeno. Posteriormente, se determinó la actividad biológica de los?VHHs binders? en un ensayo de neutralización (suero variable ? virusconstante) contra Candid#1.Resultados. Se obtuvieron 70 posibles Nanobodies anti JUNV a partirde 200 clones ensayados. Tres de los 70 clones definidos como ?VHHsbinders? fueron capaces de neutralizar a Candid#1 y a la cepa atenuadaXJCl3 de JUNV, pero no neutralizaron a las cepas patógenas CbaIV4454y XJ. Cuando se investigó el blanco hacia el cual estaban dirigidos losVHHs se encontró que los mismos reaccionaban contra lanucleoproteína viral (N), hecho sorprendente ya que hasta el presenteno se han descripto anticuerpos neutralizantes anti-N.Conclusiones. A pesar de que los VHHs estudiados no mostraronactividad neutralizante contra las cepas patógenas de JUNV, losresultados encontrados demuestran la factibilidad de neutralizar lainfectividad de JUNV utilizando la tecnología de los nanoanticuerpos. Almismo tiempo, estas herramientas abren una puerta de estudio a laposibilidad de que la nucleoproteína N se encuentre asociada a laenvoltura viral y, de esa manera, pueda comportarse como un blancode neutralización.