EL VIRUS DE SARAMPIÓN ACTIVA LA EXPRESIÓN GÉNICA DE PROTEÍNAS MORFOGÉNICAS ÓSEAS EN CULTIVOS PRIMARIOS DE OSTEOBLASTOS DE RATA.

AYALA PEÑA, VICTORIA; SANTILLÁN, GRACIELA; SCOLARO, LUIS

Vaquerías - Córdoba

Jornada; Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Virología; 2012

Sociedad Argentina de Virología - AAM

Las proteínas morfogénicas óseas (BMPs) pertenecen a la superfamilia del factor transformador de crecimiento beta (TGF-), y originalmente fueron descubiertas por su habilidad de inducir la formación de hueso. Además, estas proteínas modulan la respuesta inmune innata frente a múltiples infecciones controlando la inflamación. Asimismo, intervienen en la apoptosis celular inducida por virus y en la multiplicación de diversos virus tales como poliomavirus, virus de la inmunodeficiencia humana, virus Epstein Barr, virus de la hepatitis B y C, y virus sarampión (MeV). La otosclerosis, una enfermedad de los huesecillos del oído que causa pérdida de la audición por engrosamiento de los mismos, ha sido relacionada con la infección por MeV. Por otro lado, en biopsias de huesecillos de pacientes con otosclerosis se ha encontrado alterado el patrón de expresión de diversas BMPs. Por ello, con la finalidad de encontrar un sistema de estudio modelo de dicha enfermedad, se planteó estudiar los efectos producidos por MeV en cultivos de osteoblastos de calvaria (OBC) de rata neonata sobre la expresión de proteínas importantes para la diferenciación y proliferación de dichas células. Para ello, se emplearon técnicas de cuantificación de infectividad viral (unidades formadoras de placas), cuantificación de expresión de proteínas por QRT-PCR y determinación del efecto citopático (EC) inducido por el virus, por microscopía convencional. En este trabajo demostramos que MeV es capaz de infectar a los OBC in vitro. La infección de dichas células a una moi de 0,01 UFP/cél. produjo un pico de infectividad (107 UFP/ml) al día 2 p.i., momento a partir del cual comenzó a observarse un marcado EC que culminó al día 5 p.i. con la destrucción completa del cultivo. Por otro lado, se comprobó un aumento en la expresión de BMP-4, 5, 6 y de la fosfatasa alcalina (marcador de diferenciación osteoblástica) en los cultivos infectados (12h p.i.) respecto de los controles sin infectar con factores de aumento 4, 3.5, 17 y 2, respectivamente. La estimulación de las BMPs se comprobó incluso cuando la infección se llevó a cabo luego de 72 h de sometidas las células a un proceso de diferenciación, inducido por tratamiento con un medio osteogénico. En estudios previos demostramos que la estimulación purinérgica con ATP de OBC incrementó la expresión génica de diversas BMPs siendo esta modulación dependiente de la vía de la fosfatidil inositol 3 kinasa (PI3K/AKT). Sin embargo, en los OBC infectados con MeV, el tratamiento con ATP o con inhibidores de la vía PI3K/AKT no mostró alterar el efecto inducido por la infección viral sobre la expresión génica de estas proteínas, obteniéndose valores de aumento de las BMPs ensayadas similares a los mencionados anteriormente. Los resultados obtenidos justifican la profundización de los estudios del modelo de infección experimental de OBC con MeV como sistema in vitro para investigar el factor viral como causa probable de la otosclerosis y su eventual prevención y/o tratamiento empleando inhibidores de la multiplicación de MeV.