Estudio de la síntesis de interferón y respuesta a dicha citoquina en células A549 persistentemente infectadas con virus Junín

CUERVO, EUGENIA; SCOLARO, LUIS

Buenos Aires

Jornada; Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Virología; 2013

Sociedad Argentina de Virología - AAM

El virus Junín (JUNV), causante de la fiebre hemorrágica argentina, es capaz de infectar cultivos celulares produciendo infecciones agudas y persistentes. Hemos caracterizado un cultivo de células A549 (adenocarcinoma humano) persistentemente infectadas con JUNV cepa XJCl3, denominadas A3. Las mismas, producen virus infeccioso a bajo título, no presentan efecto citopático y son resistentes a la sobreinfección con JUNV. Asimismo, las células A3 mostraron una deficiencia en la producción de interferón (IFN) frente a estímulos de sobreinfección, de transfección con liposomas o de estimulación con poly(I:C). Se vió anteriormente que la inducción de la expresión de RIG-I, receptor capaz de reconocer ARNdc, fue menor en estas células respecto de células A549 frente al estímulo con poly(I:C) (10 µg/ml) a nivel del mRNA y la proteína. Lo mismo se observó para el mensajero de IFNB. Para continuar con este estudio se analizaron los genes de Viperina y MDA5 (miembro de la familia de receptores tipo RIG-I). Para ambos genes se observó un aumento de su expresión frente al tratamiento con poly(I:C) para las células A549. En el caso de las A3, la inducción de Viperina fue menor y no se observó inducción para MDA5. Para el estímulo por infección con JUNV de las A549 el aumento registrado fue mayor que en el caso de la sobreinfección de las A3 con este virus. Frente a estos resultados se realizó un ensayo de protección frente a la infección con virus de la estomatitis vesicular (VSV) en ambos tipos celulares estimulados con poly(I:C) o IFNα (4.104UI/ml) En el caso de las células A3, el tratamiento con poly(I:C) no redujo el número de UFP de VSV colocadas mientras que sí se redujo al tratar con IFN. En células A549, ambos tratamientos redujeron el número de UFP esperado. Se decidió entonces estudiar la expresión de RIG-I, frente al estímulo con IFN. Por western blott se observó un aumento de la expresión de esta proteína al tratar los cultivos celulares con IFN. Al estudiar la expresión de esta proteína por inmunofluorescencia, se observó que las células A549 presentaron un patrón difuso de fluorescencia citoplasmática que cambió a granulado al ser estimuladas con IFN o infectadas con JUNV. En todos los casos, las células A3 presentaron el patrón granulado que se intensificó al tratarlas con IFN y permaneció inalterado al sobreinfectarlas con JUNV. Para comprobar que las diferencias observadas entre las células A549 y las A3 fueran debidas a la presencia de JUNV en las células persistentes y no a algún tipo de selección a nivel genético sufrida por el cultivo, se realizó un clonado biológico evaluándose la respuesta frente a los diferentes estímulos de clones negativos, es decir no infectados, la cual fue comparable a la de las células A549. Estos resultados permiten concluir que la infección persistente de JUNV en células A549 modula negativamente la respuesta de IFN a nivel de su inducción pero no así a nivel de la susceptibilidad al mismo.