LA NUCLEOPROTEÍNA DEL VIRUS JUNÍN Y SU POSIBLE FUNCIÓN COMO FACTOR DE TRADUCCIÓN VIRAL.

LINERO, FLORENCIA; WELNOWSKA, EWELINA; CARRASCO, LUIS; SCOLARO, LUIS

Vaquerías, Córdoba

Jornada; Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Virología; 2012

Sociedad Argentina de Virología

Los virus como parásitos intracelulares han desarrollado estrategias que permiten una competencia efectiva de sus mRNAs por los factores celulares de traducción. El agregado de una estructura 7-metil guanosisna (cap) en el extremo 5`y de una secuencia poliadenilada (poli-A) en el extremo 3`, constituyen las principales modificaciones post transcripcionales de los mRNAs celulares, que permiten el ensamblado de complejos proteicos responsables de una traducción eficiente. El virus Junín (JUNV), agente etiológico de la Fiebre Hemorrágica Argentina, pertenece a la familia Arenaviridae, familia para la cual se han descripto mRNAs virales con estructuras 5´-cap y ausencia de estructuras 3´poli-A. Por otro lado, trabajos previos de nuestro laboratorio sugirieron un mecanismo no canónico de inicio de la traducción para JUNV. El objetivo del presente trabajo consistió en la profundización de estos estudios mediante el análisis de la participación del complejo celular de inicio de la traducción cap-dependiente, eIF4F, en la multiplicación de JUNV y su posible interacción con la nucleoproteína viral (N). eIF4F se encuentra constituido por tres factores principales:eIF4A (RNA helicasa), eIF4G (proteína de andamiaje) y eiF4E (proteína de unión al cap). En primer lugar se realizó un ensayo de western blot e inmunofluorescencia indirecta a fin de evaluar la síntesis y localización sub-celular de dichos factores durante la infección con el virus. Los resultados mostraron que la infección con JUNV no alteró la síntesis de ninguno de los factores estudiados como así tampoco indujo una re-localización significativa de los mismos. Sin embargo, se observó una marcada co-localización de N con los factores eIF4A y eIF4GI, lo cual no fue observado para eIF4E. Estos resultados se complementaron mediante ensayos de inmunoprecipitación en los cuales se comprobó la presencia de N en complejos inmunoprecipitados con anti cuerpos anti- eIF4A y anti- eIF4GI, pero no con anticuerpos anti- eIF4E. En base a estos datos se postuló la posible participación de eIF4A y eIF4GI en la replicación de JUNV. Esta hipótesis fue comprobada mediante ensayos de silenciamiento y expresión de proteínas dominantes negativas para dichos factores, comprobándose el requerimiento de eIF4A y eIF4GI en la multiplicación de JUNV. La independencia de eIF4E se comprobó mediante el silenciamiento de dicho factor, hecho que no afectó la multiplicación de JUNV. Resultados similares fueron obtenidos para los arenavirus Tacaribe (TCRV) y Pichinde (PICV), sugiriendo una independencia del factor eIF4E en la multiplicación de estos virus. Por otro lado, el empleo de una columna de cap conjugado a sefarosa, evidenció la interacción de N con dicha estructura. En base a los resultados obtenidos, se propone un modelo de traducción no canónica para JUNV en el cual la participación de eIF4A y eIF4GI sería necesaria para la replicación del virus, mientras que el factor de unión al cap, eIF4E, sería reemplazado por N. Esta independencia respecto del factor eIF4E no estaría restringida a JUNV, ya que TCRV y PICV mostraron un comportamiento similar.