ESTUDIO DE LA VÍA DE SEÑALIZACIÓN DE INTERFERÓN DURANTE LA INFECCIÓN PERSISTENTE IN VITRO CON VIRUS JUNÍN.

CUERVO, EUGENIA; SCOLARO, LUIS

Vaquerías, Córdoba

Jornada; Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Virología; 2012

Sociedad Argentina de Virología

El virus Junín (JUNV), causante de la fiebre hemorrágica argentina, es capaz de infectar cultivos celulares produciendo infecciones agudas y persistentes. En nuestro laboratorio caracterizamos un cultivo de células A549 (adenocarcinoma humano) persistentemente infectadas con JUNV cepa XJCl3, denominadas células A3. Las mismas, producen virus infeccioso a bajo título, no presentan efecto citopático y son resistentes a la sobreinfección con JUNV. Asimismo, las células A3 mostraron una deficiencia en la producción de interferón (IFN), ya sea en su condición basal como frente a los estímulos de sobreinfección y de transfección con liposomas. En este trabajo se estudió la respuesta de las células A3 frente a inductores de IFN y se analizó la expresión de distintos genes celulares y virales involucrados en dicha respuesta. Para inducir, se utilizó poly (I:C), un análogo sintético de ARN doble cadena. Se empleó solo, como ligando del receptor toll-like tipo 3 (TLR-3) y en menor medida de las helicasas: gen del ácido retinoico (RIG-I) y la proteína de melanoma asociada a diferenciación 5 (MDA-5) o combinado con un agente transfectante (LyoVec) como ligando directo de RIG-I/MDA-5. Se cuantificó el IFN presente en sobrenadantes de células A549 y A3 al cabo de 24 hs de tratamiento con poly (I:C) 10 µg/ml y poly (I:C)-LyoVec 1 µg/ml, mediante un ensayo de actividad biológica de reducción de placas del virus de la estomatitis vesicular en células Vero. En ambos casos, la actividad antiviral detectada en los sobrenadantes de las A3 luego del tratamiento, no fue detectable, en oposición a la de las células A549 que lograron disminuir el número de placas colocadas. Se estudió la presencia de ARN mensajero por PCR cuantitativa de los genes celulares de RIG-I, IFNB y TLR3, involucrados en la vía de síntesis del IFNβ y de la leucemia promielocítica (PML), gen estimulado por IFN y de los genes virales de la nucleoproteína (N), del precursor glicoproteíco (GPC) y de la proteína Z, que fueron evaluados en células A549 y A3 bajo distintos tratamientos: infección/sobreinfección con JUNV, infección con virus Dengue y tratamiento con poly (I:C) 10 µg/ml. En A3 y en A549 infectadas con JUNV se observó expresión de N, GPC y Z independientemente del tratamiento recibido. Para el caso de RIG-I, se observó un aumento de su expresión frente al tratamiento con poly(I:C) para los dos tipos celulares, mientras que para la infección con JUNV el aumento sólo se registró para las A549. En cuanto al TLR3, su expresión se vió inducida en ambos tipos celulares frente a todos los tratamientos. Por su parte, la expresión del gen de IFN se vió estimulada para las infecciones agudas con ambos virus en las células A549 pero no así en A3. La expresión de PML siguió un patrón similar en ambos tipos celulares, pero fue siempre mayor en las células A3. Estos resultados permiten concluir que la infección persistente de JUNV en células A549 modula negativamente la respuesta de IFN frente a distintos inductores como así también frente al desafío con virus homólogo (JUNV) y heterólogo (Dengue).