ESTRATEGIA TRADUCCIONAL DEL VIRUS JUNÍN: PARTICIPACIÓN DEL COMPLEJO DE INICIO DE LA TRADUCCIÓN CELULAR eIF4F EN LA SÍNTESIS DE LAS PROTEÍNAS VIRALES

LINERO, FLORENCIA; WELNOWSKA, EWELINA; CARRASCO, LUIS; SCOLARO, LUIS

Buenos Aires

Congreso; X Congreso Argentino de Virología; 2011

Sociedad Argentina de Virología - AAM

Los virus son parásitos intracelulares obligados, por lo cual dependen completamente de la maquinaria traduccional de la célula hospedadora para sintetizar sus proteínas. Esta dependencia los ha llevado a desarrollar distintas estrategias de reprogramación traduccional a fin de asegurar la competencia efectiva de sus mARNs con los mARNs celulares por la maquinaria de traducción. En este trabajo se analizó la estrategia traduccional utilizada por el virus Junín (JUNV), agente etiológico de la fiebre hemorrágica argentina. El estudio se centró fundamentalmente en el proceso de inicio de la traducción, evaluándose la participación del complejo eI4F constituido por los factores: eIF4E, eIF4A y eIF4GI. Resultados previos demostraron que la participación de la vía de PI3K/Akt, principal reguladora de la traducción cap-dependiente, no sería clave en la síntesis de los antígenos virales, a pesar de la presencia de estructuras cap en los extremos 5´de los mARNs virales. En este trabajo se corroboró esta independencia mediante la expresión de un plásmido dominante negativo para 4E-BP (proteína regulatoria de eIF4E), el cual no mostró efectos marcados en la replicación de JUNV evaluados a través de ensayos de rendimiento viral e inmunofluorescencia indirecta (IFI). Por otro lado el silenciamiento de eIF4GI, mediante siARNs específicos, redujo la expresión de las proteínas virales mediante ensayos de IFI obteniéndose valores de 29% y 62% para células infectadas transfectadas con el sieIF4GI o siControl, respectivamente. Estos resultados se confirmaron evaluando el efecto del clivaje de dicho factor inducido por la expresión de la proteasa 2A de poliovirus analizado mediante marcado metabólico (35S-metionina), observándose una inhibición en la síntesis de antígenos virales. Resultados similares fueron obtenidos para el factor eIF4A, en los cuales se determinó una reducción dosis-dependiente en la replicación de JUNV frente al tratamiento con hippuristanol, inhibidor de la actividad de eIF4A, encontrándose una inhibición de 1 log en el título infectivo a la concentración de 5 uM. Por otro lado la expresión de un plásmido dominante negativo para dicho factor, redujo un 43% la multiplicación de JUNV evaluada mediante rendimiento viral. Estos resultados indicarían una estrategia de traducción alternativa en la cual la participación de eIF4E, integrante canónico del complejo eIF4F no sería requerida, sugiriendo la participación de una proteína celular o viral que actúe en reemplazo de este factor. A favor de esta hipótesis se comprobó la interacción de la nucleoproteína viral (N) con los factores eIF4A y eIF4GI, mediante ensayos de inmunoprecipitación y microscopía confocal, indicando que esta proteína viral estaría formando parte de los complejos de traducción de los mARNs virales. En función de los resultados expuestos se plantea un modelo de reprogramación traduccional para JUNV en el cual eIF4E no sería mayoritariamente requerido para la traducción de los antígenos virales, siendo la actividad de este factor reemplazada por N que mediante su interacción con los factores eIF4A y eIF4GI favorecería la traducción de las proteínas virales.