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El arenavirus Junín (JUNV), agente causal de la fiebre hemorrágica argentina, posee dos glicoproteínas de envoltura: G1 (proteína periférica, anti-receptor) y G2 (proteína de transmembrana, con capacidad fusogénica a pH ácido). Esta capacidad fusogénica permite el desnudamiento del virus una vez que ha ingresado a la célula y puede ponerse de manifiesto a través de la formación de sincicios en cultivos celulares infectados con JUNV. La intensidad de este fenómeno biológico se correlaciona con la virulencia de las distintas cepas de este agente. Dado que los polisacáridos sulfatados, tales como la heparina, el dextrán sulfato (DS), pentosán polisulfato, etc han sido indicados como inhibidores de la fusión de membranas mediada por virus, en este trabajo se encaró el estudio de la acción del dextrán sulfato sobre la multiplicación de JUNV, en particular sobre la fusión mediada por G2. En primer lugar se determinó la concentración efectiva 50% (CE50%) de DS 8k (8000 Da) y DS 5k (5000 Da) en función de la infectividad producida en cultivos de células Vero infectadas con las cepas atenuadas XJCl3 y CbaIV4454 y tratadas con los compuestos. Los valores obtenidos oscilaron entre los 45 y 76 µg/ml cuando los compuestos estuvieron presentes desde el comienzo de la infección y de 79 a 110 µg/ml cuando se los agregó luego de la hora de adsorción. Los estudios se continuaron con DS 8k. Cultivos infectados y tratados a tiempos tardíos de la infección mostraron una reducción dosis dependiente del porcentaje de células fusionadas luego de incubarlos a pH 5. Esta reducción no se vió acompañada de una reducción en la expresión de G1 en la membrana de la célula infectada determinada mediante un ensayo de inmunofluorescencia indirecta (IFI). Debido a que la inhibición en la formación de sincicios podria ser consecuencia del efecto directo de DS 8k sobre la interacción de G1 y el receptor celular se analizó el "binding" de virus purificado y marcado a la célula. Los niveles de radioactividad asociada al cultivo celular resultaron similares en los cultivos tratados y sin tratar. Del mismo modo, la cantidad de radioactividad internalizada no se redujo de manera significativa en los cultivos con DS 8k. A fin de estudiar el comportamiento de G2 perteneciente a una cepa virulenta de JUNV se procedió al clonado del precursor glicoproteico (GPC) de la cepa XJ en el vector de expresión pcDNA4/HisMax (modificado). El ensayo de la capacidad fusogénica de células Vero transfectadas con la construcción mencionada se evaluó sometiendo a estos cultivos a pH ácido y observando los sincicios producidos por tinción con Giemsa e IFI. Los sincicios producidos resultaron de tamaño pequeño (6±2 núcleos/sincicio) a pesar de la marcada expresión de las glicoproteínas virales en las células transfectadas. El tamaño pequeño de los sincicios podría atribuirse al hecho de que en el ensayo de transfección se obtuvieron células aisladas productoras de GPC en la monocapa y no focos de células productoras de antígenos como ocurre en una infección. Al igual que en células infectadas, no se observó actividad fusogénica a pH neutro. Conclusiones Los compuestos DS 8k y DS 5k presentaron actividad inhibitoria frente a la multiplicación de JUNV en células Vero. Si bien el agregado de DS 8k a tiempos tardíos de la infección no afectó la expresión de G1 en la membrana celular, produjo una marcada inhibición en la formación de sincicios. El DS 8k no interfirió en la adsorción ni en la internalización de JUNV al cultivo celular. Estos resultados señalan al mecanismo de fusión como posible blanco de acción de estos polisacáridos. La posibilidad de obtener sincicios en células transfectadas con el pcDNA-GPC permitirá profundizar el estudio del comportamiento de G2 de la cepa XJ frente a este tipo de compuestos.

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