Efecto del 5-fluoruracilo en infecciones del virus Junín in vitro

FERNÁNDEZ BELL FANO, PABLO; SCOLARO, LUIS

Córdoba, Argentina

Jornada; XXIX Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Virología; 2009

Sociedad Argentina de Virología - Asociación Argentina de Microbiología

El virus Junín (JUNV), agente etiológico de la fiebre hemorrágica argentina, es capaz de infectar cultivos celulares produciendo infecciones de tipo agudas y persistentes. En células Vero, JUNV desarrolla una infección aguda con alta producción de infectividad, síntesis y expresión de todos los antígenos virales y producción de efecto citopático (EC) desembocando en una infección persistente caracterizada por una producción baja y aleatoria de partículas infecciosas, ausencia de antígeno viral G1 y de EC y resistencia a la sobreinfección con virus homólogo. Para estudiar las diferencias entre ambos tipos de infecciones utilizamos el mutágeno 5 fluoruracilo (5-FU), que puede ser incorporado al ARN produciendo mutaciones, provocando situaciones de extinción viral por acumulación de errores en el genoma viral. A nivel celular, el 5-FU inhibe la timidina sintetasa y se incorpora al ADN produciendo errores y rupturas que llevan al arresto celular, apoptosis o senescencia. En este trabajo se investigó la respuesta de cultivos infectados con JUNV frente a tratamientos prolongados con 5-FU.  Para ello se infectaron células Vero con la cepa XJCl3 de JUNV, comenzándose al 3er día p.i. un tratamiento con 5-FU (5µg/ml), empleándose en paralelo células persistentemente infectadas. Al cabo de dicho tratamiento los cultivos infectados de manera aguda presentaban un número muy reducido de células sobrevivientes. Por el contrario, los cultivos persistentes y los no infectados mantuvieron un número de células elevado aunque menor a los respectivos cultivos no tratados. Durante el tratamiento se observó un sinergismo en cuanto al EC entre la infección con JUNV y el tratamiento con el 5-FU en las células infectadas de forma aguda (reducción de viabilidad de 90,3% con respecto al control sin tratar y sin infectar). Las células sobrevivientes de los cultivos tratados durante 2 semanas desarrollaron una infección persistente mientras que los tratados por 3 semanas no presentaron células viables. Estas diferencias se analizaron mediante una determinación del ciclo celular de los cultivos realizando una citometría con ioduro de propidio.  Las células infectadas de forma aguda y tratadas con 5-FUmostraron niveles de S de 33±6% mientras que las no tratadas el 21±4%. Los cultivos persistentemente infectados mostraron niveles de S de 11±2%  independientemente del tratamiento recibido. Por el contrario, las células sin tratar mostraron valores de 10±2% y 1,0±0,5% para los cultivos no tratados y tratados, respectivamente. La diferencia de viabilidad entre las células infectadas de manera aguda y las persistentemente infectadas también se observó al tratar los cultivos con agentes inductores de apoptosis: staurosporina (1-10µM), arsenito de sodio (5-25 µg/ml) y luz ultravioleta (8-24 J/m2). CONCLUSION: El 5-FUprodujo una acumulación en fase S de las células Vero infectadas con JUNV en forma aguda observándose además una disminución en la viabilidad, exacerbada por la citopatogenicidad del virus sobre el cultivo. Por otro lado, las persistentes mostraron un arresto en la replicación celular sin observarse una variación en las fases del ciclo. La viabilidad conservada de los cultivos persistentemente infectados podría correlacionarse con la resistencia que los mismos exhibieron frente al tratamiento con inductores de apoptosis.