Modificación de la expresión de las ribonucleoproteínas heterogéneo-nucleares de tipo A/B en células Vero infectadas con virus Junín

MAETO, CYNTHIA A.; LINERO, FLORENCIA; SCOLARO, LUIS; CASTILLA, VIVIANA

Córdoba, Argentina

Jornada; XXIX Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Virología; 2009

Sociedad Argentina de Virología - Asociación Argentina de Microbiología

El virus Junín (JUNV) agente causal de la fiebre hemorrágica argentina, es capaz de inducir infecciones persistentes en cultivos celulares y dichas infecciones difieren de la infección aguda en su capacidad de producir virus infeccioso, en la expresión de proteínas virales y en la inducción de efecto citopático. Se conoce poco acerca de los factores celulares que estarían involucrados en el desarrollo de ambos tipos de infección. Se ha propuesto que las ribonucleoproteínas heterogéneo nucleares (hnRNPs), proteínas celulares con capacidad de unión a ARN, participan en los procesos de síntesis de ARN y proteínas de diversos virus con genoma de ARN que, de forma similar a JUNV, replican en citoplasma. En trabajos previos comprobamos que el silenciamiento de la hnRNP A1 inhibe la multiplicación de JUNV en células Vero, indicando un posible de dicha proteína en la replicación viral. El objetivo de este trabajo fue analizar la expresión de las proteínas hnRNPs A/B en cultivos de células Vero infectadas con JUNV en forma aguda y persistente. En primer lugar se examinó mediante la técnica de western blot la expresión de las hnRNPs tipo A/B en células Vero no infectadas o infectadas con JUNV transcurridas 24, 48 o 72 horas de infección. Este análisis se realizó además en un cultivo persistentemente infectado con JUNV, denominado V3, el cual presentaba elevada expresión de la nucleoproteína viral de nucleocápside (N), ausencia de expresión de la glicoproteína viral G1 e incapacidad de producir virus infeccioso. Se determinó que las células infectadas de forma aguda exhibían niveles de expresión de las hnRNPs A/B similares a las células no infectadas, mientras que las células V3 mostraban una notoria disminución (80% de reducción de la expresión de estas proteínas). A partir del cultivo de V3 y de un cultivo control de células Vero no infectadas se obtuvieron, por el método de dilución límite, diversos clones de V3 y de Vero. Todos los clones de V3 analizados presentaron muy bajos niveles de expresión de las hnRNPs A/B en comparación con los clones de células Vero. Se investigó mediante análisis por inmunofluorescencia indirecta, el efecto de la infección viral sobre la localización intracelular de hnRNP A1. Para ello, las células se transfectaron con plásmidos que permiten la sobreexpresión de hnRNP A1 de localización predominantemente nuclear, o de una proteína mutada en su secuencia de importación nuclear (G274A), de expresión citoplasmática. La infección aguda provocó un aumento de la expresión de hnRNP A1 en el citoplasma de las células infectadas sin modificar el patrón de expresión de la mutante G274A. Por el contrario, en las células V3 la localización de ambas proteínas resultó predominantemente nuclear. CONCLUSIÓN: La infección aguda de células Vero con JUNV no modifica los niveles totales de expresión de las hnRNPs A/B, por el contrario dichos niveles se encuentran marcadamente disminuidos durante la persistencia. Asimismo, la infección viral induce cambios en la localización intracelular de hnRNP A1, siendo dicha expresión principalmente citoplasmática en la infección aguda y predominantemente nuclear en la persistencia.