Las células madre Gliales de Müller disminuyen su potencial regenerativo y presentan alteraciones estructurales durante la degeneración de la retina en ratones rd

VOLONTÉ Y.; GERMAN O.L.; DIBO MJ; AYALA PEÑA VB; GARELLI A; ROTSTEIN NP; POLITI LE

Buenos Aires

Congreso; X; 2016

Asociación Investigación en Visión y Oftalmología

Las células madre Gliales de Müller disminuyen su potencial regenerativo y presentan alteraciones estructurales durante la degeneración de la retina en ratones rd Müller glial stem cells decrease their regenerative potential and have structural alterations during retina degeneration in rd mice Volonté YV; German OL; Dibo MJ; Ayala Peña VB; Garelli A; Rotstein NP; Politi LE.Instituto de Investigaciones Bioquímicas. Depto. Biología, Bioquímica y Farmacia, Universidad Nacional del Sur-CONICET, Bahía Blanca, Argentina. E-mail: yvolonte@criba.edu.arOBJETIVOS: En la retinitis pigmentosa (RP) las neuronas fotorreceptoras (FR) mueren selectivamente por apoptosis causando la pérdida progresiva e irreversible de la visión.Una estrategia prometedora para lograr un tratamiento más efectivo o eventualmente su cura es la de regenerar los FR eliminados utilizando células gliales de Müller (CGM), consideradas células madre. Sin embargo, en mamíferos las CGM no regeneran los FR ni en la RP ni en su modelo animal, los ratones ?rd?, portadores de una degeneración similar a la RP. Las causas de esta incapacidad, el rol de las CGM y sus posibles alteraciones en esta patología están aún inexplorados. Nuestra hipótesis es que la degeneración de los FR en estas enfermedades alteraría el ?diálogo? neuro‐glial requerido para el normal funcionamiento de las CGM. El objetivo de este trabajo fue analizar si las CGM se ven afectadas en su estructura y potencial regenerativo durante la degeneración en la retina rd.MÉTODOS: Se realizaron cultivos mixtos neuro-gliales de retinas de ratones wt y rd de 2 días postnatal (PN), co-cultivos de neuronas rd y CGM wt, o neuronas wt y CGM rd, y cortes histológicos de estas retinas a distintos días PN. En los cultivos la muerte neuronal se analizó por ensayo de TUNEL y los niveles de la proteína pro-apoptótica BAX por PCR. Se investigó la expresión de nestina, marcador de células madre, por inmunocitoquímica y qRT-PCR en cultivos gliales puros, cultivos mixtos neurogliales, co-cultivos neuro-gliales y muestras de retina entera.RESULTADOS: El porcentaje de neuronas TUNEL-positivas fue mayor en cultivos rd que en los wt, lo que se correlacionó con una mayor transcripción de Bax en neuronas rd. La expresión de nestina en las CGM rd en cultivos mixtos fue menor que en los wt. En retinas enteras, el ARNm de nestina mostró un pico al día PN4, menor en retinas rd que en las wt. Los cortes histológicos revelaron alteraciones estructurales en las CGM rd incluyendo varicosidades y engrosamientos a la altura de la capa de células ganglionares y pérdida de la expresión de nestina. La co-incubación de CGM rd con neuronas wt aumentó la expresión de nestina y de su ARNm en las CGM rd, sugiriendo que la interacción de las CGM con los FR podría regular su potencial regenerativo. CONCLUSIÓN: Estos resultados muestran alteraciones estructurales en las CGM rd y una disminución en su expresión de nestina y sugieren que la degeneración de los FRs rd alteraría el ?diálogo? de los FR con las CGM, afectando su capacidad regenerativa.SUBSIDIOS: FONCYT, CONICET y UNS.