Las células de Muller en los procesos regenerativos de los fotorreceptores.

POLITI L.E.; SIMON V.; DE LOS SANTOS EB; GARELLI A; INSUA MF; ROTSTEIN N.P.

Buenos Aires

Congreso; IV Congreso de la Asociación Argentina de Investigación en Visión y Oftalmología (AIVO); 2007

Asociacion Argentina de Investigacion en Vision y Oftalmologia

LAS CELULAS DE MULLER EN LOS PROCESOS REGENERATIVOS DE LOS FOTORRECEPTORES L Politi *; M V Simón*;  B de los Santos*; A Garelli # F Insua ## y N Rotstein *. (*) Universidad Nacional del Sur e Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca; (#)  Instituto de Neurociencias de Alicante, España; (##) Instituto Valenciano de Infertilidad, Valencia, España Objetivos: Durante los procesos degenerativos de la retina los fotorreceptores (FRs) mueren por apoptosis conduciendo irreversiblemente a la ceguera. Se ha propuesto como posible estrategia terapéutica el reemplazo de los FRs perdidos utilizando células de Müller que tienen propiedades de células madre. Para ello, es esencial establecer los factores capaces de regular la proliferación glial o que promuevan la diferenciación como FRs. Materiales y Métodos: realizamos cultivos de células gliales de Müller y neuronales de retinas de rata, incubados en medios suplementados con suero, los cuales fueron repicados para obtener cultivos secundarios y terciarios. Determinamos también los efectos de varios factores tróficos sobre la proliferación y diferenciación celular, incubando las células en un medio químicamente definido, con o sin el factor derivado de la glia (GDNF), insulina y el lípido ácido docosahexaenoico (ADH). Evaluamos luego la proliferación glial con bromodeoxiuridina (BrdU) y la presencia de marcadores de células multipotentes, gliales, neuronales y de los FRs.  Resultados: Los cocultivos primarios presentaron células de Müller, neuronales y redondas indiferenciadas. Más del 80% de las células gliales incorporaron BrdU y expresaron marcadores de células multipotentes de retina (Pax6 y nestina), parámetros que disminuyeron con el tiempo de cultivo. El GDNF estimuló el reingreso de las células al ciclo celular, mientras que la insulina promovió la expresión de marcadores neuronales. Notablemente, tanto en los cultivos secundarios como terciarios, una pequeña fracción de las células redondas expresaron opsina y Crx, marcadores de los FRs, cuya expresión aumentó significativamente luego del agregado de ADH a los cocultivos. Conclusiones: estos resultados demuestran que es posible obtener células capaces de expresar marcadores neuronales y de FRs en sucesivos repiques a partir de cocultivos neurogliales, que la expresión de estos marcadores es mantenida en los subcultivos, y que el GDNF regula la proliferación glial, mientras que insulina y ADH favorecen el inicio de la diferenciación neuronal.