La glia de Müller permite preservar neuroblastos y diferenciarlos en fotorreceptores y el ácido docosahexaenoico y la esfingosina-1-fosfato evitan su apoptosis

POLITI LE; SIMON MV; DE GENARO P.; ABRAHAN C.E.; DE LOS SANTOS EB; ROTSTEIN N.P.

Buenos AIres

Congreso; 6a Reunión Anual AIVO; 2009

AIVO

LA GLIA DE MÜLLER PERMITE PRESERVAR NEUROBLASTOS Y DIFERENCIARLOS EN FOTORRECEPTORES Y EL ÁCIDO DOCOSAHEXAENOICO Y LA ESFINGOSINA-1-FOSFATO EVITAN SU APOPTOSIS Politi LE, Simón MV, DeGenaro P, Abrahan CE de los Santos EB, Rotstein NP. Instituto de Investigaciones Bioquímicas, Universidad Nacional del Sur-CONICET, Bahía Blanca. inpoliti@criba.edu.ar OBJETIVOS: La generación de nuevas neuronas permitiría reemplazar a las perdidas en enfermedades neurodegenerativas de la retina. Previamente establecimos que la interacción neurona-glía de Müller permite mantener y/o generar neuroblastos (NB) indiferenciados y multipotentes aún en cultivos secundarios. Investigamos ahora si dichos NB son capaces de diferenciarse en fotorreceptores (FRs) y si el Ácido Docosahexaenoico (DHA) y la Esfingosina-1-fosfato (S1P), que previenen la apoptosis de los FRs, evitan la muerte neuronal en los repiques. MÉTODOS: Co-cultivos neurogliales primarios y secundarios de retina de rata se trataron con o sin DHA y S1P. Los NB se identificaron por la expresión de marcadores de progenitores (Nestina, Pax-6, incorporación de BrdU) y su diferenciación en FR analizando la expresión de marcadores como Crx y opsina. La funcionalidad de los FRs se determinó por su captación de glutamato y GABA y la apoptosis neuronal por TUNEL y análisis de la fragmentación nuclear. RESULTADOS: Los co-cultivos neurogliales secundarios presentaron células redondas, de las cuales el 80% y 10% expresaron Crx y opsina, respectivamente. De éstas, un 1% coexpresaron Nestina o Pax-6 o incorporaron BrdU, coexpresión que sugiere que estos NB inicialmente se dividieron y luego iniciaron su diferenciación como FRs. La incorporación de glutamato y Gaba por mecanismos de alta afinidad y la determinación por autorradiografía que células con morfología de FRs y amacrinas incorporaron glutamato y GABA, respectivamente sugiere que estas neuronas serían funcionales. El agregado de DHA y S1P a los subcultivos redujo en un 50% y 80%, respectivamente, el número de neuronas apoptóticas. CONCLUSIONES: La interacción neuro-glial permite generar y/o mantener NB, que son capaces luego de diferenciarse en FRs, mientras que moléculas como el DHA y la S1P permitirían prevenir la muerte temprana de las nuevas neuronas generadas. Estos hallazgos destacan la importancia de la glía, DHA y S1P en la regeneración neuronal. SUBSIDIOS: SECYT (UNS), CONICET, FONCYT