El Hexaclorobenceno induce apoptosis a través de la activación sostenida de la vía de señalización de ERK1/2 y la generación de ROS

FLORENCIA CHIAPPINI; CAROLINA PONTILLO; ANA CLARA DE TOMASO; LAURA ALVAREZ; ANDREA RANDI; DIANA KLEIMAN DE PISAREV

Mar del Plata

Congreso; LVI Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2011

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

El hexaclorobenceno (HCB) es un contaminante ambiental deletéreo para la salud humana, e inductor de disfunciones endocrinas, inmunológicas y cáncer en animales. Demostramos previamente que el HCB, induce la expresión de TGF-β1 y apoptosis en células tiroideas de rata FRTL-5. Objetivos: Estudiar el efecto del HCB sobre el estado oxidativo celular, y el rol de las especies reactivas de oxígeno (ROS) y de las MAPKs en la inducción de apoptosis en células FRTL-5. Se realizaron ensayos en función del tiempo (2, 6, 8, 24 y 48h) con HCB 5 μM y dosis (HCB: 0,005; 0,05; 0,5 y 5 μM) a las 8h. Resultados: a) los niveles de ERK1/2-P [Western blot (WB)] aumentaron en función de la dosis y tiempo de tratamiento con un pico a las 8h (208%, p?0.05); b) los niveles de JNK-P (WB) aumentaron 60 y 80% a las 6 y 8 h, respectivamente (p<0.05), retornando a valores control (C) a las 24 h, c) los niveles de p38-P (WB) no se modificaron entre las 2 y 48 h; se observó un aumento a los 15 min (104% p?0.01) d) el pre-tratamiento con PD98059, un inhibidor específico de MEK1 llevó la viabilidad celular (ensayo de MTT) a niveles C a las 24h; e) el pre-tratamiento con SP-600125, inhibidor específico de JNK, no revirtió la pérdida de viabilidad celular; f) la expresión de la enzima catalasa (RT-PCR) aumentó a partir de las 8 hrs (150% p?0.001) hasta las 24 hrs. La expresión de enzima Cu-ZnSOD (RT-PCR) disminuyó a las 2 y 6 hrs. (64% y 30% p?0.01, respectivamente) y aumentó a las 24 hrs (115% p?0.001) de tratamiento, g) los niveles intracelulares de ROS, determinados por fluorescencia (DCF-DA), aumentaron a las 4 h, con HCB 0,5 y 5 µM (750 y 685% respectivamente);  h) el pre-tratamiento con el antioxidante TROLOX, revirtió la pérdida de la viabilidad celular. Conclusión: El HCB induce la pérdida del balance entre el crecimiento y la muerte celular en células FRTL-5. La inducción de apoptosis ocurre por mecanismos que involucran la generación de ROS, y la activación sostenida de ERK1/2.