Obtención de aptámeros capaces de detectar espermatozoides en proceso de apoptosis.

VERÓNICA L. FARINI; PABLO SIPOWICZ; VERA L. MONCALERO; FACUNDO ALVAREZ-HEDUÁN,; CLAUDIA PERANDONES; RADRIZZANI MARTIN

Mar del Plata

Congreso; LV Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica, Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Fisiología y XLII Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Farmacología Experimental.; 2010

SAIC -SAFis - SAFE

Los espermatozoides en los cuales se disparan estos procesosde apoptosis se produce una fragmentación del ADN, que puedeafectar severamente la fertilidad en humanos así como en otrosmamíferos. Los espermatozoides que han expresado fosfatidilseri-na en la superficie celular separados con las columnas de anexinaV mejoran notablemente su fertilidad. Los aptámeros son, gene-ralmente, secuencias oligonucleotídicas (DNA o RNA) obtenidas?in vitro?. Consisten en una secuencia lineal de nucleótidos queen solución tienen la capacidad de unirse específicamente y congran afinidad a una gran variedad de moléculas blanco. La ventajasobre los anticuerpos es que no poseen restricciones inmunoló-gicas y son capaces de reconocer conformaciones diferentes deuna misma proteína. El objetivo del trabajo es aplicar la tecnologíade aptámeros contra células espermáticas  in situ para identificarmarcadores moleculares del estado del espermatozoide en el se-men. Utilizamos como blanco a espermatozoides fijados despuésde tratarlos a 54° C durante 3 min. Los aptámeros elegidos sonunidos espermatozoides sin tratar en restas y aquellos aptámerosque reconocen diferencialmente a los espermatozoides tratados,son clonados y secuenciados.Pudimos obtener dos clones soncapaces de reconocer a los espermatozoides que pierden su mo-vilidad en ensayos in vivo. Estos clones colocalizan con tincionesvitales con el colorante de Hoechst y con la anexina V- fluores-cente. Muy pocos espermatozoides marcaron solamente con laAnexina V y no con nuestros aptameros y cuando colocalizan, lohacen de forma incompleta indicando que reconocen moléculasdiferentes a la fosfatidilserina. El reconocimientos del aptámeropudo verse en espermatozoides de bovinos así como en humanosy en ovinos. Con estos resultados pudimos concluir que los aptá-meros presentados poseen los requerimiento necesarios para serpuestos a prueba en procesos de separación de espermatozoidespara mejorar la calidad del semen a utilizar.