TRANSFERENCIA DE ACIDOS NUCLÉICOS ASISTIDA POR NANOPARTÍCULAS MAGNÉTICAS EN LA LÍNEA CELULAR HT-29

MARIA BELEN CERDA; MILENA BATALLA; EDUARDO CAFFERATA ; MARIA ELENA IEZZI ; OSVALDO PODHAJCER; OLGA MYKHAYLYK ; LUCIA POLICASTRO

Congreso; XIII ENCUENTRO DE SUPERFICIES Y MATERIALES NANOESTRUCTURADOS; 2012

INTRODUCCIÓN La radiorresistencia de los tumores es uno de los principales problemas en el tratamiento contra el cáncer. El objetivo de nuestro trabajo es  silenciar genes asociados a la radiorresistencia mediante el uso de pequeños ARN de interferencia (siARN), a fin de generar un efecto radiosensibilizador. En nuestro laboratorio, hemos demostrado que existe un aumento de la expresión  de  la proteína ku-80 en líneas muy radiorresistentes. La expresión de esta proteína esta asociada a la reparación de rupturas doble cadena de la molécula de ADN, generadas por la radiación ionizante. En particular, la línea HT-29 de cáncer colorrectal, radioresistente y con altos niveles de expresión de Ku80, es refractaria a la transferencia de siARNs por los métodos tradicionales. En este trabajo, hemos evaluado la utilización de nanopartículas magnéticas (NM) para aumentar la eficiencia de trasferencia de siARN mediante el uso de magnetofection. MATERIALES Y MÉTODOS Se generó un clon emisor de luz a partir de la línea celular HT-29, mediante la transfección estable de un plásmido que contiene el gen reportero de la luciferasa. Se silencio la expresión de luciferasa mediante la utilización de un siARN (siARNLUC). Para esto último, se acomplejó el siARNLUC a nanopartículas magnéticas (NM) recubiertas en polietilenimina (PEI-MAg4), de un diámetro de 35nm, evaluado por el ensayo de dispersión de la luz dinámica. Se testearon distintas relaciones de NM:siARN-LUC (0.5:1; 1:1; 2:1; 4.1), donde se varió además las cantidades de siARN-LUC, 20; 40; 80 nM. Las células fueron expuestas a gradientes de campos magnéticos (70-250mT) durante 30 min, utilizando una placa magnética conteniendo imanes de neodimio. Se evaluó la capacidad de silenciamiento de los complejos mediante detección de luminiscencia. Posteriormente, se utilizaron las relaciones NM:siARN-LUC más efectivas evaluadas en el modelo anterior, para silenciar la expresión de ku-80 en la línea HT-29. RESULTADOS Y DISCUSIÓN Se evaluó la capacidad de transfección de complejos formados por distintas relaciones de NM:siARNLUC, y se obtuvo un silenciamiento de hasta el 60% en la expresión de  luciferasa en todas las relaciones NM:siARN conteniendo 80nM de siARN. Con esta condición, se obtuvo aproximandamente un 60% de silenciamiento de Ku-80 en la línea HT-29. Posteriormente, se evaluó la modulación de radiosesibilidad en esta línea transfectada con un siARN contra Ku-80. El parámetro α, obtenido a partir del ajuste de la curva de la sobrevida, varió de 0,03+0,05 a 0,3+0,1, respectivamente en las células transfectada con siRNA control respecto de las transfectadas con un siARN-contra Ku80. Por lo tanto,  se obtuvo un efecto radiosensibilizador en la línea celular HT-29. En los próximos experimentos evaluaremos otras relaciones de NM:siRNA a fin de lograr un silenciamiento total de la proteína Ku-80