Caracterización de aislamientos clínicos argentinos de Clostridium difficile: ensayos de susceptibilidad y esporulación frente a agentes antimicrobianos.

DI CRISCIO, J.; MINNAARD, J.; TREJO, F. M. Y PÉREZ, P. F.

Congreso; VIII Congreso de la Sociedad Argentina de Bacteriología, Micología y Parasitología Clínica (SADEBAC).; 2018

Introducción y objetivos. Clostridium difficile es un bacilo gram positivo patógeno esporulado cuya infección en humanos se asocia al uso de antibióticos y su forma de diseminación es el esporo. La interacción del microorganismo con antimicrobianos y el ciclo de esporulación son elementos clave para comprender los casos de recurrencia El objetivo del presente trabajo es estudiar el efecto de antimicrobianos sobre aislamientos de C. difficile en cuanto a la susceptibilidad y el ciclo de esporulación. Materiales y métodos. Se estudiaron dos aislamientos clínicos de C. difficile (ALCD3 y 117) y la cepa de referencia VPI10463. Por dilución en caldo (DC), siguiendo las normas del Clinical and Laboratory Standars Institute (CLSI), se evaluó la susceptibilidad determinando la concentración inhibitoria mínima (CIM) frente a Metronidazol (MTZ), Vancomicina (VAN), Clindamicina (CLI), Piperacilina-Tazobactam (PIP-TAZ), Cloranfenicol (CLF), Moxifloxacina (MXF) y una bacteriocina, la Nisina (NIS). Sobre los tubos sin desarrollo al evaluar la CIM, se realizó una siembra en agar BHI suplementado con carbón activado para diferenciar bacteriostasis (BS) de bactericidia (BC). Mediante microscopia de contraste de fases se evaluó la capacidad de C. difficile de esporular en presencia de concentraciones sub-inhibitorias de CLI (2 µg/ml). Se registraron las proporciones de bacilos (B) y de esporos en diferentes fases: oscura (Eo), brillante (Eb) y libre (L).Resultados. Las tres cepas mostraron una CIM de 2µg/ml frente a MTZ y VAN, y de 4µg/ml para PIP-TAZ. Frente a CLI, la cepa 117 presentó CIM=16µg/ml mientras que VPI 10463 y ALCD3 mostraron CIM=8 µg/ml. Frente a CLF la CIM fue de 8µg/ml para las tres cepas. La NIS produjo inhibición del crecimiento de las cepas VPI 10463 y ALCD3 a partir de 4µg/ml y para la cepa 117 a partir de 128 µg/ml. Las cepas VPI 10463 y 117 resultaron inhibidas con 2µg/ml de MXF y la cepa ALCD3 lo fue a 16µg/ml. A partir de estos resultados, se obtuvieron las concentraciones BC que se muestran en la siguiente tabla AntibióticoBC(µg/ml)ALCD3VPI 10463117MTZ222VAN222PIP-TAZ444CLI81616CLF81616NIS44128MXF3244La MXF fue BS a 16µg/ml para ALCD3 y a 2 µg/ml para VPI10463 y 117; CLF lo fue a 16µg/ml para VPI10463 y 117. CLI resultó BS para VI10463 a 16µg/ml. En presencia o no de CLI (2 µg/ml) las proporciones de esporos aumentaron en el tiempo, con máximos de Eb al día 7 en las 3 cepas. Para las cepas ALCD3 y 117 crecidas en presencia de CLI hubo un menor incremento de L respecto al control crecido sin CLI. Conclusiones. Siguiendo los lineamientos de la CLSI, podemos concluir que las tres cepas evaluadas resultaron sensibles a CLF, VAN, MTZ y resistentes a CLI. La cepa ALCD3 es resistente a MXF, mientras que VAPI10463 y 117 son sensibles a este ATB. La CLI reduce la capacidad de C. difficile de esporular en un efecto cepa dependiente. Palabras clave Clostridium difficile, antimicrobianos, esporulación.