Estudio de la interacción entre levaduras aisladas de kefir y Clostridium difficile in vitro

DIOSMA, G.; TREJO, F. M.; PÉREZ, P. F.; DE ANTONI, G. L. Y GARROTE, G. L.

Rosario

Jornada; XIII Jornadas Argentinas de Microbiología; 2008

La utilización de levaduras como probióticos humanos se encuentra en los primeros estados de desarrollo, sin embargo la experiencia ha demostrado el éxito del empleo de Saccharomyces boulardii en el tratamiento de diarreas asociadas a antibióticos y colitis recurrentes por Clostridium diffícile. El kefir es una leche fermentada de la cual se han reportado propiedades promotoras de la salud y en la cual se encuentran además de bacterias ácido lácticas, diferentes especies de levaduras que constituirían una población potencialmente probiótica a considerar. El objetivo del presente trabajo fue analizar la capacidad de cepas de levadura aisladas de kefir de antagonizar la adhesión y el efecto biológico de Clostridium diffícile mediante ensayos in vitro. Se seleccionaron cinco cepas de levaduras capaces de mantener la viabilidad luego de ser sometidas durante 2 hs a pH 2,5 a 37°C y resistir el tratamiento con sales biliares al 1%. Se estudió en medio líquido la capacidad de sobrenadantes de cultivo de Saccharomyces lypolytica CIDCA 8112, S. cerevisiae CIDCA 81103, Kluyveromyces marxianus CIDCA 8154, aisladas de gránulos de kefir y S. boulardii aislada de un probiótico comercial para inhibir el desarrollo de la cepa 117 de C. diffícile proveniente de una muestra clínica. Se ensayaron diferentes concentraciones de los sobrenadantes no observándose disminución del crecimiento del patógeno en ninguno de los casos. Se analizó asimismo la influencia de la presencia de levaduras sobre la capacidad de adhesión de C. difficile a enterocitos. Para ello se incubaron células Caco-2/TC7 durante 1 hora con una suspensión DO=2 de levaduras a 37º C y en atmósfera de 5% de CO2 en forma previa a la incubación con la suspensión de C. difficile y posteriormente se realizó coloración de Gram y recuento de bacilos al microscopio. Se detectó que la preincubación con las cepas de levaduras disminuye entre un 40% (CIDCA 8154) y un 75% (CIDCA 81103) la adhesión de C. difficile ATCC 9689 a enterocitos in vitro. Se realizó un ensayo in vitro donde se probó la capacidad de las levaduras de reducir el efecto citotóxico de sobrenadantes de cultivos de C. difficille). De esta manera, los resultados muestran la capacidad de ciertas levaduras aisladas de kefir de antagonizar la interacción de C. difficile y enterocitos humanos en cultivo así como reducir el efecto biológico de los sobrenadantes de dicho patógeno.