Inhibición de la actividad biológica de Clostridium difficile por bifidobacterias y lactobacilos

TREJO, F. M.; PÉREZ, P. F. Y DE ANTONI, G. L.

Córdoba

Congreso; XI Congreso Argentino de Microbiología; 2007

<i>Clostridium difficile</i> sobrecrece en el intestino de pacientes tratados con antibióticos (Clindamicina) y produce toxinas (TcdA enterotoxina, TcdB citotoxina) provocando diarreas y colitis pseudomembranosa. El tratamiento es por administración oral de vancomicina y metronidazol. Otras alternativas emplean probióticos tales como <i>Sacharomyces boulardii</i>, <i>Lactobacillus rhamnosus</i> GG, <i>Bifidobacterium longum</i> y <i>Enterococcus faecium</i> SF68, pero se sabe poco de los mecanismos que interfieren con los factores de virulencia de <i>C. difficile</i>. El objetivo fue evaluar la capacidad de bifidobacterias y lactobacilos de inhibir la actividad citopática (AC) de sobrenadantes de <i>Clostridium difficile</i> (cepa ATCC 9689 y  aislado clínico 117). Bifidobacterias y lactobacilos se crecieron junto con <i>C. difficile</i> en caldo BHI 20 hs a 37C en anaerobiosis (co cultivo: CC). Se determinó la AC de los sobrenadantes. La AC se evaluó sobre células Vero. Las células que permanecieron adheridas se tiñeron con cristal violeta y se midió la absorbancia luego de extraer con etanol. Otros ensayos para determinar los factores involucrados en la inhibición de la AC fueron i) crecimiento de <i>C. difficile</i> en presencia de sobrenadantes de <i>Bifidobacterium</i> o <i>Lactobacillus</i>, ii) actividad citopática de sobrenadantes de <i>C difficile</i> en presencia de sobrenadantes de <i>Bifidobacterium</i> y <i>Lactobacillus</i>, iii) pre incubación de sobrenadantes  de clostridios con bifidobacterias o lactobacilos, iv) crecimiento de clostridio en presencia de lactobacilos o bifidobacterias muertas por UV. Se evaluó la producción de toxinas mediante técnicas inmunológicas con anticuerpos anti TcdA y TcdB. Ciertas cepas de <i>Bifidobacterium</i> (538, 5325, 5310) y <i>Lactobacillus</i> (83114) inhiben la AC de <i>C.  difficile</i> en CC. Dicho efecto no se debió a la inhibición del crecimiento de <i>C difficile</i> ni a la presencia de sobrenadantes de <i>Bifidobacterium</i> o <i>Lactobacillus</i>. Los sobrenadantes de la cepa 5310 presentaron una inhibición parcial de la actividad citopática contra la cepa 117 de clostrido. <i>Bifidobacterium</i> y <i>Lactobacillus</i> tratados por UV no produjeron inhibición en la AC. La incubación de los sobrenadantes con las bacterias no inhibió la AC. Durante el CC la producción de toxinas disminuyó. Durante el CC con <i>C. difficile</i>, ciertas cepas de <i>Bifidobacterium</i> y <i>Lactobacillus</i> inhiben la producción de toxinas no así su crecimiento. Dicha inhibición sólo es posible cuando <i>Bifidobacterium</i> y <i>Lactobacillus</i> se encuentran viables. Estos efectos no pueden atribuirse a los sobrenadantes de <i>Bifidobacterium</i> o <i>Lactobacillus</i> ni a la adsorción de toxinas pero sí a una disminución de la producción de toxinas. Estos resultados contribuyen a la  comprensión del antagonismo de la virulencia de <i>C. difficile</i> por microorganismos probióticos.